产品说明

Glu (OtBu)-Val-Cit-PAB-OH 是在经典 Val-Cit-PAB 氨基端引入侧链叔丁酯保护谷氨酸的酶可裂解 ADC 连接子前体，属于电荷修饰型 VC 衍生连接子。常规 Val-Cit-PAB 氨基端只有单一氨基，而谷氨酸骨架提供了额外一条侧链羧基，用叔丁酯（OtBu）封闭保护，主链氨基可继续偶联马来酰亚胺或者其他靶向基团；当 OtBu 在酸性条件脱除之后，侧链释放游离羧基，引入负电荷，用来调节整条连接子的亲疏水性、电荷分布，是近年用来优化 ADC 血浆稳定性、降低肝脏非特异性摄取的热门改造方向。分子序列：Glu (OtBu)-Val-Cit-PAB-OH，末端是 PAB 苄醇，和 Boc-Val-Cit-PAB 结构位点一致，需要 PNP 活化之后再连接毒素。谷氨酸的引入和 Gly3 亲水链逻辑不同：Gly3 是中性柔性亲水，Glu (OtBu) 是可切换电荷体系，脱叔丁酯之后带负电，通过电荷效应降低疏水相互作用，抑制 ADC 聚集，同时减少和带正电细胞膜、白蛋白的非特异性吸附，改善 PK 特征。该连接子非常适合高 DAR、强疏水毒素体系，很多文献用 Glu-VC-PAB 骨架构建 MMAE、MMAF ADC，对比传统 MC-VC-PAB，电荷优化版本体内暴露量更高，肝脏蓄积更低。

作用机理与结构特点

酶切释放单元仍然是 Val-Cit-PAB，Cathepsin B 剪切 Val-Cit 肽键，PAB 1,6-消除释放毒素；谷氨酸侧链不参与酶识别与剪切，仅作为理化调节模块。OtBu 是酸敏保护基，和 Boc 脱保护条件接近，TFA 处理脱掉叔丁基，释放游离-COOH；在合成过程中，OtBu 封闭羧基，避免侧链羧基在酰胺缩合、PNP 活化阶段发生分子内环化、自身偶联副反应，保证反应选择性。在 ADC 循环于血浆时，如果保留叔丁酯，侧链中性；如果合成后期脱掉 OtBu，侧链带负电。研究者可以主动选择是否脱除 OtBu，得到中性或者带负电两套衍生物，用来对比电荷对 ADC 性质的影响。负电荷带来的优势：降低整体疏水性，减少 ADC 聚集；降低和血浆蛋白、正常细胞表面的非特异性静电结合，降低脱靶毒性；缺点是电荷过高有时会影响肿瘤细胞抗原介导的内吞效率，需要平衡电荷强度，这也是 Glu 修饰连接子需要大量构效筛选的原因。

主要应用方向

第一是电荷优化型 ADC 连接子-毒素中间体合成，用来改善传统 VC 连接子 ADC 体内药代，降低肝脏、脾脏非特异性富集，提升治疗窗口。第二用于构建 pH 响应双重调控连接子，谷氨酸羧基除了理化调节，也可以进一步接 pH 敏感基团，和 Cathepsin B 酶切形成双重触发释放体系。第三用于 PDC、蛋白药物偶联，利用谷氨酸双羧基骨架，实现双位点修饰，构建同载体搭载双毒素的偶联物。第四用于构效关系研究，对比无 Glu、Glu (OtBu)、游离 Glu-COOH 三种骨架，系统评估侧链电荷、*性对 DAR、聚集、血浆半衰期、旁观者效应的影响。第五用于荧光探针合成，在谷氨酸主链或者侧链引入荧光团，构建可裂解荧光报告探针，检测溶酶体蛋白酶活性。该试剂 PAB 端为苄醇，需要 PNP 活化才能连接含氨基毒素。

详细使用指南

溶剂选用无水 DMF、DCM；Glu (OtBu) 侧链叔丁酯对碱稳定，PNP 活化、HATU 缩合都可以正常操作，和 Boc 保护基化学兼容性一致。PNP 活化方案同 Boc-Val-Cit-PAB，冰浴、PNP-Cl+DIPEA，DCM 体系；活化得到 Glu (OtBu)-Val-Cit-PAB-PNP，再和毒素偶联。脱 OtBu 使用 20–30% TFA/DCM，室温 30–60 min，和 Boc 脱保护条件接近；OtBu 对 TFA 敏感度略高于 Boc，不要延长酸解时间，防止 Val-Cit 肽键降解。合成路线有两种：路线一，先活化 PAB 接毒素，再 TFA 脱 OtBu，再接 MC 马来酰亚胺；路线二，先脱 OtBu、接 MC，再接毒素。注意：游离羧基存在时，会和 PNP 活性酯发生副反应，因此绝大多数情况优先选择先接毒素、再脱叔丁酯。 纯化流动相甲酸体系优先，减少羧基峰拖尾；含游离羧基的产物在反相 HPLC 上保留偏弱，有机相比例适当下调。投料时留意谷氨酸手性，该原料一般为 L-Glu 构型，避免 D 型异构体混入影响酶切效率。

储存与质控注意事项

-20℃避光干燥保存，防潮防酸汽。质控关注 HPLC 纯度、质谱、叔丁酯水解杂质（游离羧基杂质）。长期储存定期检测 OtBu 水解比例，酸汽环境下该杂质会逐步上升。