一、材料相关介绍

Alkyne-Val-Cit-PAB-PNP 是一种面向抗体-药物偶联物（ADC）、多肽偶联物（PDC）及酶响应探针构建的双功能可裂解连接子，分子由四个功能域串联而成：
Alkyne – Val-Cit – PAB – PNP
  • Alkyne（末端炔基）：位于分子首端，作为点击化学手柄，可与叠氮（–N₃）修饰的抗体、蛋白、多肽或纳米载体发生铜催化叠氮-炔环加成（CuAAC），形成稳定三唑键，实现位点选择性偶联；也可改用无铜点击体系（SPAAC）规避铜离子对蛋白的氧化风险。
  • Val-Cit（缬氨酸-瓜氨酸二肽）：组织蛋白酶 B（Cathepsin B）特异性识别与切割序列。在生理血浆环境（pH 7.4）中保持化学稳定，进入靶细胞溶酶体酸性环境后被选择性水解，触发释放程序。
  • PAB（对氨基苄基）自消除单元：Val-Cit 酶切后，PAB 通过分子内 1,6-苄基消除反应自发断裂，使载荷以完整结构脱离，避免多肽残基干扰下游分子活性。
  • PNP（对硝基苯基碳酸酯）：高活性离去基团，在温和无水有机条件中与含伯胺（–NH₂）的毒素、染料或探针直接酰胺化偶联，免去了苄醇中间体再活化步骤，是“预制活化型”连接子。
该分子不是独立制剂，而是 ADC 合成链路中的“中间桥梁”：先与氨基型载荷（如 MMAE、MMAF、SN-38、荧光染料）组装成 Linker-Payload，再通过炔基端点击偶联到叠氮化抗体上，形成均一性更可控的定点偶联产物。

二、基础参数与物理化学性质

  • 中文名称：炔基-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄基-对硝基苯酯
  • 英文名称：Alkyne-Val-Cit-PAB-PNP（Alkyne-Valyl-Citrullinyl-4-aminobenzyl 4-nitrophenyl carbonate）
  • 常用别称：Alkyne-VC-PAB-PNP、炔基Val-Cit连接子、点击化学ADC接头、PNP活化型Val-Cit linker
  • CAS号：2748039-77-0
  • 分子式：C₃₁H₃₈N₆O₉
  • 分子量：约 638.67 Da
  • 性状：白色至淡黄色固体粉末（受纯度与结晶状态影响）
  • 溶解性：易溶于无水 DMSO、DMF、DCM；微溶于水，水相中 PNP 酯易水解，建议现配现用
  • 纯度：科研级 ≥95%（HPLC、LC-MS、NMR 质控，附 COA）
  • 稳定性：PNP 碳酸酯对水、醇、胺类亲核试剂敏感；炔基需避光防氧化；干燥避光 -20℃ 可保存 12 个月
  • 储存条件：-20℃ 惰性气体保护、干燥、避光、密封，避免反复冻融与受潮
  • 运输条件：低温冰袋或干冰，避光防水
  • 供应商：西安瑞禧生物科技有限公司
  • 温馨提示：本产品仅供科研实验使用，不能用于人体实验、临床诊疗及食品用途。

三、中心内容：科研应用与释放逻辑

3.1 定点 ADC 构建流程

  1. 载荷偶联：无水 DMSO/DMF 中，将 Alkyne-Val-Cit-PAB-PNP 与 NH₂-毒素（MMAE 等）在弱碱（DIPEA）条件下反应，生成 Alkyne-Val-Cit-PAB-载荷；
  2. 点击偶联：将上述产物与叠氮化抗体（N₃-Ab）在 CuSO₄/抗坏血酸钠/配体体系（或无铜 DBCO 体系）下反应；
  3. 纯化：凝胶过滤/超滤去除游离染料、铜离子、未反应连接子；
  4. 表征：HPLC 测纯度，LC-MS 确认偶联，UV 定量 DAR（药物抗体比）。
相比随机赖氨酸偶联，该路线 DAR 分布更集中、异质性更低。

3.2 酶响应释放机制

完整 ADC 经抗原介导内吞 → 溶酶体 Cathepsin B 切割 Val-Cit → PAB 1,6-消除 → 游离毒素释放。
研究时可设：
  • 重组 Cathepsin B 体外酶切（LC-MS 检测毒素释放速率）；
  • 组织蛋白酶抑制剂对照；
  • Cathepsin B 高/低表达细胞系对比。

3.3 探针与诊疗一体化

ADC 合成——Alkyne-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄基-PNP Alkyne-Val-Cit-PAB-PNP 基础参数与物理化学性质

  • 偶联荧光染料（Cy5、FITC）构建“可激活探针”：未切时荧光淬灭/空间隔离，酶切后信号恢复；
  • 偶联核素螯合剂做放射性成像；
  • 一端连毒素、一端连荧光，做小动物肿瘤模型药效实时示踪。

3.4 连接子构效研究

该分子作为无 PEG 基准接头，可与含 PEG 间隔臂的同系物平行实验：
  • 对比疏水性、聚集倾向（ThT/DLS）；
  • 对比血浆稳定性、肝脏摄取、体内清除；
  • 替换二肽序列（Val-Ala、Phe-Lys）研究酶切选择性。

3.5 操作边界

ADC 合成——Alkyne-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄基-PNP Alkyne-Val-Cit-PAB-PNP 基础参数与物理化学性质

  • PNP 端忌水相长期放置，偶联必须用无水溶剂；
  • CuAAC 需加 BTTP/TBTA 类配体降低铜毒；
  • 终产品需严格去除对硝基苯酚副产物与游离载荷。

四、瑞禧生物相关产品与供应体系

ADC 合成——Alkyne-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄基-PNP Alkyne-Val-Cit-PAB-PNP 基础参数与物理化学性质

1. Val-Cit 系列连接子（不同端基）

  • Alkyne-Val-Cit-PAB-OH（羟基前体，CAS 2748039-76-9）
  • MC-Val-Cit-PAB-PNP（巯基偶联型）
  • NHS-Val-Cit-PAB-PNP（氨基偶联型活化酯）
  • Azide-Val-Cit-PAB-PNP（叠氮端点击）
  • DBCO-Val-Cit-PAB-PNP（无铜点击）

2. 含 PEG 间隔臂改良型

  • Alkyne-PEG4-Val-Cit-PAB-PNP
  • DBCO-PEG4-Val-Cit-PAB-PNP
  • Alkyne-PEG2/8/12/24-Val-Cit-PAB-PNP
  • mPEG-Val-Cit-PAB 系列（亲水性与聚集调控）

3. 二肽序列变体

  • Val-Ala-PAB-PNP
  • Phe-Lys-PAB-PNP
  • Ala-Ala-Asn-PAB 系列（不同酶切谱）

4. 双响应/智能连接子

  • SS-PEG-Val-Cit-PAB-PNP（还原+酶切双触发）
  • TK-Val-Cit-PAB-PNP（ROS 敏感）
  • pH-腙键-Val-Cit 复合连接子

5. 载荷与偶联配套

  • 氨基型毒素：MMAE、MMAF、SN-38、多西他赛衍生物
  • 叠氮化抗体/蛋白定制
  • 荧光载荷：Cy5-N₃、FITC-N₃、RB-N₃
  • 纯化与表征：制备型 HPLC、LC-MS、GPC、DLS、Cathepsin B 酶切验证

6. 定制服务

  • 端基自由组合（Alkyne/Azide/DBCO/MC/NHS/COOH/NH₂）
  • PEG 长度与亲疏水平衡定制
  • 毫克级至克级合成、冻干分装
  • 完整 COA：NMR、HPLC、MS、酶切释放曲线、DAR 支持

五、小结

Alkyne-Val-Cit-PAB-PNP 把“点击偶联手柄 + 酶敏感二肽 + 自消除臂 + 预制活化酯”压缩进单一小分子，是定点 ADC 与酶响应递送系统的高模块化砌块。它的科研价值不在单一反应，而在把偶联位置、释放时机、载荷完整性三个变量拆开可独立调控。瑞禧生物可提供从该原料、PEG 化变体、序列改造到偶联纯化的全链条科研支持。
温馨提示：本品为科研试剂，仅供实验室研究使用，不能用于人体实验、临床诊断或治疗。