产品说明

产品概述

Boc-Val-Cit-PAB-PNP 是 Boc 分支路线的预活化 PNP 活性酯连接子，是 Boc-Val-Cit-PAB 的活化成品，也是 ADC 研发领域经典老牌商品化 VC-PNP 连接子，大量早期临床前 MMAE-ADC 文献采用该原料制备 payload。分子结构：Boc 酸敏保护氨基、Val-Cit 酶切二肽、PAB 自消除间隔、末端 PNP 碳酸酯离去基团，PNP 已经预先接好，用户拿到之后可以直接和带伯胺的毒素偶联，省去 PNP 活化步骤，减少活化过程带来的降解杂质，非常适合不具备精细有机合成条件的药理、细胞实验室快速搭建 ADC 样品。它和 Fmoc-Val-Cit-PAB-PNP 功能对等，区别仅在于氨基端保护基是 Boc（酸脱）而非 Fmoc（碱脱），两条路线正交互补。很多 CDMO 平台同时储备 Boc 和 Fmoc 两套 PNP 连接子，根据毒素酸碱耐受特性选择路线：毒素不耐碱，优先 Boc 路线；毒素不耐酸，优先 Fmoc 路线。Boc-Val-Cit-PAB-PNP 的工艺成熟度*高，杂质谱、降解路径研究充分，是评估新毒素、新抗体时的基准对照连接子之一，也是 Brentuximab vedotin 先导化合物研发阶段使用的同骨架体系。

作用机理与结构特点

生物释放机制标准 VC-PAB 通路：血浆稳定，溶酶体 Cathepsin B 剪切 Val-Cit，PAB 发生 1,6-消除释放活性毒素；PNP 仅作为偶联离去基团，偶联完成后脱离产物，不进入终 ADC。Boc 保护基在 PNP-胺偶联的弱碱条件下稳定，不会提前脱除；毒素偶联完成之后，TFA 处理脱 Boc，露出游离伯胺，再和 MC-OSu 缩合，得到 MC-Val-Cit-PAB-毒素 payload，用于抗体巯基偶联。该路线很大优势：偶联毒素步骤是弱碱中性条件，没有强碱，对很多碱敏感毒素友好，比如部分卡奇霉素、烯二炔类毒素，在哌啶等强碱环境下快速失活，就必须选用 Boc 路线，避开 Fmoc 脱保护的强碱步骤。缺点就是后续需要 TFA 酸处理，对酸不稳定的毒素不适用。PNP 碳酸酯的反应选择性高，优先和伯胺反应，在合理 pH 下对羟基、酰胺基本惰性，副反应可控；缺点是遇水快速水解，原料储存、反应体系都必须严格控湿。

主要应用方向

核心用途是快速合成 Boc 型 VC-PAB-毒素中间体，适配碱敏感毒素的 payload 制备，是药理实验室高通量构建 ADC 候选分子库的标准试剂。第二作为基准对照连接子，和 Fmoc 系列、Glu 修饰、Gly3 修饰的新一代连接子平行对比，用来评估亲水 / 电荷改造对 ADC 性质的增益。第三用于酶响应荧光探针合成，将 PNP 和氨基荧光染料偶联，得到 Cathepsin B 可裂解荧光探针，用于细胞成像、酶活检测。第四用于 PDC、靶向肽偶联药物合成，将毒素连接在靶向肽氨基上，构建肽药偶联物。该试剂顺序固定：PNP 先接毒素→TFA 脱 Boc→再接马来酰亚胺→再偶联抗体，不能颠倒顺序。

详细使用指南

无水 DMSO/DMF 体系，严格除水；投料摩尔比连接子：毒素 = 1.1~1.4:1，DIPEA 调 pH 7.3–8.4，室温避光搅拌 2–4 h，HPLC 监测毒素消耗。不使用高浓度碱，防止 PNP 快速水解。反应结束后制备 HPLC 纯化，乙腈-水-甲酸体系，冻干得到 Boc-连接子-毒素。后续脱 Boc：20–25% TFA/DCM，室温 30–45 min，乙醚沉淀得到 TFA 盐；TFA 盐溶于 DMSO，加 DIPEA 中和之后，和 MC-OSu 进行酰胺缩合，得到终可偶联抗体的 MC-VC-PAB-毒素。如果毒素对酸不稳定，禁止选用该连接子，切换 Fmoc-Gly3-Val-Cit-PAB-PNP 路线。反应全程避光，PNP 基团对紫外光照有一定降解风险。纯化后产物分装冻干，避免水溶液长期存放。

储存与质控注意事项

-20℃密封避光干燥保存，PNP 活性酯稳定性弱，有效期短于醇前体；分装单次使用量，避免反复开盖吸水水解。质控：HPLC、质谱、水解游离醇杂质、水分。操作时防护对硝基苯酚副产物。