产品说明

Fmoc-Val-Cit-PAB-NMeCH2CH2NMe-Boc属于带双甲基二胺侧链、Boc保护的高阶多功能Val-Cit连接子，是Fmoc-Val-Cit-PAB骨架基础上，在PAB端接入N,N'-二甲基乙二胺，其中一个仲胺用Boc酸敏感保护基封闭的复合结构。整个分子同时携带三类可调控官能单元：N端Fmoc碱敏保护氨基、中间Val-Cit酶切二肽+PAB自消除结构、末端NMeCH2CH2NMe-Boc二胺片段。Boc保护基在TFA酸性条件下脱除，释放游离仲胺；Fmoc在哌啶碱性条件脱除，释放另一端伯胺，酸碱正交保护特性是这个产品很大亮点，可以实现两端分步、选择性修饰，互不干扰。N,N'-二甲基乙二胺片段自带弱碱性，能够调节整个连接子的电荷性质、水溶性、溶酶体逃逸能力，部分研究中这类叔胺/仲胺结构可以赋予连接子pH缓冲特性，提升ADC内吞后溶酶体逃逸效率，改善payload释放后的细胞杀伤活性。Val-Cit依然保留组织蛋白酶B特异性酶切，血浆稳定，胞内酶切后PAB自消除释放payload。该结构复杂，合成难度高于普通PNP连接子，多用于创新型、差异化ADC骨架开发，常规管线很少使用，主要面向机制研究、新型可电离连接子方向。性状白色固体，同时含有Fmoc、Boc两套保护基，对酸碱都敏感，储存稳定性要求更高，杂质来源多为选择性脱保护不完全、二胺偶联异构杂质。

主要应用方向

第一，创新ADC连接子开发，利用正交保护策略，两端分别修饰：一端（脱Fmoc）接抗体/靶向多肽，另一端（脱Boc）接payload或者荧光基团；或者反过来，实现不对称偶联，构建非常规DAR、不对称结构ADC。第二，pH响应协同型可降解linker开发，N,N'-二甲基乙二胺片段具备pH质子化特性，在酸性溶酶体环境质子化，辅助溶酶体逃逸，解决部分ADC被溶酶体降解回收、释放效率偏低的痛点。第三，多模态探针合成，一端偶联荧光、一端偶联毒素，实现成像-治疗一体化探针，用于细胞示踪、药效可视化研究。第四，PROTAC、双功能降解分子的响应linker，正交保护方便分别连接靶蛋白配体和E3配体，同时加入组织蛋白酶B触发释放开关。第五，连接子电荷效应研究，对比不带二胺、单甲基胺、双甲基乙二胺结构对ADC电荷、聚集、细胞摄取、旁观者效应的影响，属于前沿构效研究试剂。该产品不用于常规MMAE标准ADC合成，主打差异化创新管线，适合高校课题组、创新药企做first-in-class连接子机制探索。

使用指南与操作规范

储存条件：-20℃，氩气密封避光干燥，同时规避酸碱蒸汽，Boc遇酸缓慢脱除、Fmoc遇强碱脱除，不能和酸、碱试剂同柜存放；必须分装单次使用量，反复开盖*易产生混合脱保护杂质。溶剂：无水DMF、DMSO为主，全程严格控无水，酸碱分步反应，避免酸碱混在同一体系。正交脱保护规则是核心：Fmoc脱除：20%哌啶/DMF，碱条件，不影响Boc；Boc脱除：20–95%TFA/DCM，酸性条件，不影响Fmoc，这是该试剂很核心的操作逻辑，必须严格分开两步。偶联策略：方案一，先脱Fmoc，暴露N端氨基，偶联抗体/靶向配体，纯化后，再TFA脱Boc，暴露二胺端仲胺，偶联payload；方案二，先脱Boc接payload，纯化后哌啶脱Fmoc再接抗体。禁止在同一体系同时加哌啶和TFA，会同时脱掉两组保护基，造成大量多点偶联杂质。反应监测：HPLC+LC-MS，同时监测Fmoc峰、Boc分子量变化，区分单脱保护、双脱保护杂质；茚三酮、TNBS显色辅助判断氨基暴露。纯化：制备HPLC，甲酸水体系适合Fmoc保留组分；TFA脱Boc后的组分要注意中和，防止酸性长时间破坏肽键。安全：TFA、哌啶都具有强腐蚀性，通风橱全套防护，TFA废液单独处理。质控重点：入库必须确认正交保护完整，无提前脱Boc或者脱Fmoc杂质；体外酶切验证，确认二胺修饰不会抑制组织蛋白酶B对Val-Cit的识别。

提醒：二胺上的甲基会带来空间位阻，payload偶联效率相比普通PNP酯偏低，需要适当提高投料当量，延长反应时间，优化碱的种类与当量。