产品说明

CY7-TAT是CY7近红外菁染料共价标记TAT穿膜肽的荧光共轭物。TAT多肽是经典阳离子细胞穿透肽，正电荷富集的序列可以高效跨过细胞膜，介导各类生物大分子、纳米载体进入胞内，是胞内、入核递送很常用的多肽配体。CY7为七甲川菁近红外荧光染料，吸收750 nm，发射770 nm，近红外一区，相比ICG，CY7在水溶液中聚集倾向更低，光稳定性优于ICG，染料淬灭更少，荧光背景更低，适合长时间成像、长时间细胞孵育示踪。
染料通常定点偶联于TAT的N端氨基或者半胱氨酸巯基，经过HPLC纯化，除去游离CY7染料，保证产物纯度，保留TAT的跨膜活性。成品一般为深绿色固体粉末，水溶性良好，可溶于PBS、纯水，少量DMSO可辅助溶解。CY7-TAT兼顾TAT优良穿膜能力与CY7稳定的近红外荧光，适合长时间动态追踪多肽在细胞和活体内的行为，是和ICG-TAT互补的两款TAT荧光探针。本产品仅用于科研实验，禁止人体临床使用。

产品应用
CY7-TAT应用方向和ICG-TAT相近，但更适合需要长时间成像、低淬灭的场景。
第一，长时间细胞动态示踪，活细胞工作站实时连续成像，长时间追踪TAT入胞过程、胞内转运轨迹，CY7抗淬灭优势明显，不容易快速失信号。
第二，细胞亚细胞定位研究，共聚焦、超高分辨显微镜观察TAT在细胞质、细胞核的分布，研究入胞机制、入核动力学。
第三，小动物活体近红外荧光成像，静脉、瘤内、黏膜给药后追踪多肽体内分布、肿瘤富集、代谢清除；CY7信号的肝胆本底干扰相比ICG略低，适合定量分析。
第四，纳米载体功能化修饰，将CY7-TAT偶联到脂质体、聚合物胶束、纳米凝胶，构建带荧光的穿膜靶向载体，评价载体的细胞穿透能力。
第五，多肽酶解稳定性研究，在血清、蛋白酶体系长时间孵育，监测荧光保留与多肽降解，筛选抗酶解改造TAT序列。
第六，体外屏障模型（血脑屏障、肠道屏障、皮肤渗透模型）穿透效率评价。
第七，多肽介导药物递送机制研究，对比阴性对照肽，明确TAT对货物胞内递送的增益效果。

使用方法
试剂-20℃避光密封保存，开盖前回温，防止水汽进入。用无菌PBS或者超纯水配制0.2–1 mM避光母液，轻柔溶解，不建议超声，避免染料降解、多肽断链。
体外细胞实验：培养基稀释至目标浓度，加入细胞，按实验需求孵育不同时长；孵育结束PBS充分洗涤，使用共聚焦、活细胞成像系统或者流式检测荧光信号。设置游离CY7、无标记TAT双对照组，排除染料吸附效应。
活体成像：根据动物模型给药，CY7通道采集荧光信号，在不同时间点定量分析组织荧光强度，绘制富集-清除曲线。 载体修饰：将CY7-TAT通过共价或者静电方式结合到纳米材料，纯化去除游离多肽，荧光分光光度计标定荧光标记效率，DLS监测粒径变化。 母液分装避光冻存，减少反复冻融；水溶液建议一周内用完，避免多肽降解。

注意事项
CY7相比ICG光稳定性更好，但依然对强光、紫外敏感，全程避光操作与保存，长时间光照会发生光漂白。 TAT阳离子特性强，很易吸附在普通塑料管壁、培养皿，推荐低吸附离心管与培养耗材，减少多肽损失、结果偏低。 TAT具备浓度依赖性细胞毒性，高浓度会造成细胞膜破损，预实验必须做浓度梯度筛选，确定安全工作区间。 缓冲体系避免强还原剂、高浓度巯基试剂，会破坏染料结构；同时避免极端pH，酸性过强会影响TAT正电荷，降低跨膜效率。 荧光信号只能代表染料位置，不能直接等同于完整多肽；在血清、酶环境实验中，需要结合HPLC、质谱验证多肽是否保持完整，区分游离染料与完整CY7-TAT。 不要和ICG混在同一成像体系，两者光谱存在部分重叠，会发生串色干扰。本产品仅限科研，不可用于人体给药、临床诊断。废弃物按多肽类生化废弃物规范处理。