产品说明

DOTA-PEG-Cyclopropene是环丙烯修饰PEG化DOTA大环螯合试剂，由DOTA螯合环、亲水PEG间隔链、高张力环丙烯（Cyclopropene）基团三部分构成。DOTA大环具备成熟的金属螯合能力，稳定结合Gd、Eu、放射性核素，用于MRI、稀土荧光、放射性成像；PEG链改善水溶性，降低分子聚集，隔离反应位点与螯合环；末端环丙烯是新一代快速生物正交点击手柄，可和四嗪（Tetrazine）发生逆电子需求Diels-Alder反应（IEDDA），属于不同于SPAAC的另一套正交点击体系，反应速率很快，是目前生物正交反应中动力学优势突出的一类反应，反应无需催化剂、常温水相快速完成，生物相容性很良好。
环丙烯结构小巧，张力高、分子量小，修饰后对目标生物分子空间构象扰动很小；和四嗪反应的正交性很强，不会和叠氮、DBCO、BCN发生交叉反应，因此可以和SPAAC点击体系组合，在同一个样本中实现两组分独立标记，是多靶点双色、多金属同时标记的核心工具。本品外观为白色固体粉末，溶于DMSO、水、PBS缓冲液；环丙烯对长时间紫外光照、强氧化剂敏感，稳定性弱于BCN、DBCO；该试剂适合快速标记、原位瞬时示踪、多通道正交成像，不适合长时间胞内孵育体系。DOTA-PEG-Cyclopropene可先螯合金属再偶联四嗪修饰底物，一步组装多模态探针，广用于活细胞快速标记、多靶点成像、质谱定量探针开发，仅限科研使用。

产品应用
DOTA-PEG-Cyclopropene核心应用是快速生物正交标记与双通道正交成像。搭配四嗪修饰荧光团、四嗪修饰抗体，利用IEDDA超快反应，在几秒到几十分钟内完成标记；同时这套体系和叠氮-BCN/DBCO SPAAC互不干扰，一套样本同时引入叠氮和四嗪两个靶点，分别用BCN-DOTA和环丙烯-DOTA标记，螯合两种不同稀土或者放射性核素，实现双靶点多色成像、双金属ICP-MS定量，是单细胞多标志物同时检测的优选方案。
其次用于活细胞瞬时动态过程追踪。IEDDA反应速度快，可以捕捉快速发生的胞内转运、膜蛋白内吞、受体瞬时聚集等动态过程；将DOTA螯合Eu³⁺后，环丙烯和细胞表面四嗪修饰配体快速偶联，实现时间分辨荧光动态成像；也用于放射性探针快速合成，螯合短半衰期放射性核素后，快速和四嗪靶向分子偶联，适配短寿命核素的快速标记流程。
同时用于纳米诊疗体系模块化组装。四嗪修饰LNP、脂质体、纳米颗粒，加入DOTA-PEG-Cyclopropene快速偶联，在载体表面引入DOTA螯合位点，后续螯合Gd或者放射性核素，构建成像-治疗一体化纳米制剂；也用于组织切片、活体预靶向标记，先注射四嗪靶向载体富集病灶，再注射DOTA-PEG-Cyclopropene实现快速二次标记，缩短体内标记等待时间。

使用方法
储存与溶解
产品-20℃严格避光密封保存，环丙烯对光照敏感，容易缓慢失活；分装小份，减少反复冻融；DMSO母液避光冷冻保存，水溶液现配现用，不要长时间放置。避免接触强氧化剂。
金属螯合操作
优先先完成金属螯合，再进行IEDDA反应；醋酸铵缓冲pH5.0–6.5螯合稀土/金属离子，纯化除去游离金属；螯合过程尽量避光，缩短孵育时间，减少环丙烯降解。
IEDDA点击偶联操作
底物为四嗪修饰分子，DOTA-PEG-Cyclopropene轻微过量（摩尔比1.1:1），中性PBS室温反应5–30 min即可完成；反应速度远高于SPAAC，需要根据四嗪活性调整时间，避免过长孵育导致环丙烯水解失活；反应完成超滤、透析纯化。活细胞标记时，体系避光配制。
注意事项
环丙烯稳定性差，不适合长时间孵育实验；正交实验设计时，区分IEDDA与SPAAC两套体系，避免交叉污染；全程避光；优先现配现用标记工作液；对比BCN、DBCO，环丙烯主打快速、双标记场景，不适合慢反应长时间标记；实验设置不含四嗪的空白对照组扣除背景。