产品说明

ICG-TAT是吲哚菁绿ICG共价标记TAT细胞穿透肽得到的荧光肽共轭物。TAT是经典阳离子跨膜肽，来源于HIV反式激活蛋白，由碱性氨基酸组成，带正电，能够高效穿透细胞膜，不依赖传统内吞途径，可携带小分子、蛋白、核酸、纳米颗粒进入细胞质甚至细胞核，是胞内递送领域应用很广的穿膜肽之一。ICG吲哚菁绿是临床获批的近红外荧光染料，吸收约780 nm、发射约800 nm，近红外二区边缘波段，组织穿透能力强、自发荧光背景低，适合活体深层荧光成像，生物相容性好。
染料一般偶联在TAT肽末端氨基或者半胱氨酸巯基，纯化去除游离ICG，保留TAT肽的跨膜活性，同时赋予肽近红外荧光示踪能力。成品为深绿色粉末，水溶性良好，可直接溶于PBS、无菌水；高浓度下ICG容易发生聚集淬灭，因此储备液不宜配置过高浓度。该产物可以直观追踪TAT肽的入胞效率、亚细胞定位、体内分布，是评价穿膜肽递送能力的标准示踪原料。本产品仅用于科研，不可直接用于人体注射、临床造影。

产品应用
ICG-TAT核心围绕穿膜肽胞内递送示踪、活体分布评价。
第一，体外细胞穿透实验，在肿瘤细胞、干细胞、原代细胞中，利用ICG荧光直观观察TAT跨膜效率、入胞速度、胞内定位，对比其他穿膜肽的递送性能。
第二，小动物活体近红外荧光成像，静脉、瘤内、局部给药后，追踪TAT肽在体内的循环、肿瘤富集、组织分布与代谢排泄行为，评估TAT的靶向潜力与体内滞留时间。
第三，载体修饰效果评价，将ICG-TAT修饰到脂质体、聚合物纳米粒、胶束表面，作为荧光探针验证载体的细胞穿透、胞内释放效果。
第四，细胞核递送研究，TAT具备入核能力，利用该探针考察多肽能否携带货物进入细胞核，用于核靶向递送体系开发。
第五，血脑屏障、黏膜穿透体外模型研究，在屏障模型上评估TAT跨屏障转运效率。
第六，多肽稳定性评价，在血清、蛋白酶溶液中孵育，通过荧光信号监测TAT肽降解、ICG解离情况，评估多肽抗酶解能力。
第七，协同给药体系筛选，联合化疗药、siRNA，研究TAT介导的胞内递送提升药效的机制。

使用方法
样品避光-20℃密封储存，取用前回温，避免水汽凝结。优先无菌水或者pH7.2 PBS配制母液，浓度控制在0.2–1 mM，避光轻柔溶解，不超声。
体外细胞实验：培养基稀释到目标工作浓度，加入细胞孵育，设置不同时间梯度；孵育结束PBS清洗，可直接用共聚焦显微镜观察胞内荧光，或者流式细胞仪定量摄取效率。注意设置单独ICG对照组，区分游离染料的非特异性吸附与TAT介导的主动跨膜。
活体成像实验：按照动物给药方案给药，在预设时间点使用ICG通道成像；ICG在体内主要经肝胆代谢、胆道排泄，成像时需要区分肝脏、肠道本底荧光。
载体修饰实验：按照多肽偶联方案将ICG-TAT修饰到纳米材料，纯化除去未结合游离肽，DLS表征粒径，荧光分光光度计测定标记效率，再开展细胞与活体评价。 母液避光分装，避免反复冻融；溶液长期放置容易出现ICG聚集，建议现配现用。

注意事项
ICG对强光、高温敏感，很易光漂白，全部操作、孵育、成像过程严格避光；ICG水溶液稳定性差，水溶液不适合长期存放，母液尽量现配现用。 ICG在高浓度、高盐环境下容易J聚集，荧光大幅淬灭，因此储备液和工作液浓度不可过高，缓冲盐浓度不宜过高。 TAT是强阳离子多肽，容易吸附在塑料离心管、培养板表面，建议使用低吸附耗材，减少多肽损耗。 TAT浓度过高时存在细胞毒性，正式实验前必须做浓度梯度毒性预实验，确定安全工作浓度；高浓度阳离子肽会破坏细胞膜，造成非特异性渗漏。 该探针荧光信号来源于ICG，不能默认荧光信号代表完整多肽，长时间血清孵育会发生酶切，染料游离，实验需要配套HPLC或者质谱验证多肽完整性。 ICG虽然临床可用，但本共轭物为科研多肽探针，未经过制剂验证，严禁直接用于人体。废弃样品避光处理，按照多肽生化废弃物处置。