产品说明

CY5-a-GalCer是将CY5花青素荧光基团与α-半乳糖神经酰胺（α-GalCer）共价偶联得到的荧光糖脂探针。α-GalCer是鞘糖脂，由半乳糖头部、鞘氨醇长链骨架与脂肪酸链组成，能够特异性激活恒定自然杀伤T细胞（iNKT细胞），是免疫学领域研究iNKT细胞活化、抗原呈递的标杆脂质抗原；CY5为五甲川花青素荧光染料，激发波长约646 nm，发射波长约662 nm，荧光亮度高，适配共聚焦显微镜、流式细胞仪常规红光检测通道。该分子保留了α-GalCer完整的糖脂骨架结构，仅在不影响抗原识别的位点修饰CY5荧光基团，很大程度维持原有生物活性，可被抗原呈递细胞表面的CD1d分子识别、装载并呈递给iNKT细胞。

本品外观为深蓝色固体粉末，可溶于氯仿、二氯甲烷、DMSO等有机溶剂，在水溶液中能够自组装形成脂质囊泡；兼具糖脂的膜亲和特性与CY5荧光示踪能力。与游离α-GalCer相比，CY5-a-GalCer无需后续染色步骤，可直接可视化追踪糖脂抗原在细胞内的转运、分选、CD1d装载过程；与其他荧光标记GalCer相比，CY5通道成熟稳定，不易与绿色荧光信号串色，适合多色共定位实验。产品HPLC纯度高，糖脂骨架稳定，荧光标记位点可控，批次差异小，仅用于科研实验，不用于临床。

产品应用
CY5-a-GalCer很核心的用途是iNKT细胞抗原呈递机制可视化研究。抗原呈递细胞（树突状细胞、B细胞、巨噬细胞）摄取CY5-a-GalCer后，通过共聚焦显微镜观察糖脂抗原进入胞内囊泡、溶酶体分选、与CD1d分子结合转运至细胞膜表面的全过程，直观追踪抗原加工转运通路，解析CD1d介导的糖脂抗原呈递调控机制。同时搭配流式细胞术，定量检测抗原呈递细胞对α-GalCer的摄取水平，比较不同细胞、不同抑制剂处理条件下抗原装载效率差异。
其次用于iNKT细胞与抗原呈递细胞之间免疫突触的成像研究。CY5标记的α-GalCer-CD1d复合物富集在免疫突触位置，可清晰观察突触结构形成、信号分子共定位情况，研究iNKT细胞活化早期的膜信号事件。该探针也用于体内示踪，给小鼠给药后，追踪CY5-a-GalCer在脾脏、淋巴结等免疫器官的分布，定位抗原主要被哪类免疫细胞捕获。
此外，CY5-a-GalCer可用于脂质膜转运、外泌体糖脂组分示踪。依靠鞘脂长链锚定在细胞膜、外泌体膜上，研究糖脂在外泌体生成、释放以及细胞间传递过程；也用于筛选调控CD1d抗原呈递的小分子药物，通过荧光信号变化评估药物对α-GalCer呈递的促进或抑制效果。

使用方法
储存与母液配制
产品-20℃避光密封干燥保存，分装成小份，规避反复冻融；CY5染料对光照敏感，全程避光操作。母液优先采用无水氯仿或者DMSO配制，避光冷冻储存；水溶液体系现配现用，糖脂在水相中长时间放置容易聚集沉降，同时荧光基团易发生淬灭。
细胞孵育标记操作
配制CY5-a-GalCer工作液，常用终浓度范围50–200 nM，根据细胞类型和成像需求调整；加入树突状细胞、巨噬细胞等抗原呈递细胞培养基中共孵育，孵育时间梯度设置，一般2–24 h。孵育结束后用预冷PBS清洗3次，去除游离未结合探针，随后可直接进行活细胞成像，或者固定后进行免疫荧光共定位染色，观察其与CD1d、溶酶体标志物的共定位。
流式与体内实验操作
流式检测：收集孵育后的细胞，PBS重悬，上机采集CY5通道荧光信号，统计阳性细胞比例与平均荧光强度；动物实验采用尾静脉或者腹腔给药，按实验方案在不同时间点取免疫器官，制备单细胞悬液或者组织切片进行荧光检测。

注意事项
避光贯穿全部操作步骤；糖脂母液充分混匀，避免局部聚集；设置未标记α-GalCer对照组，区分荧光信号带来的细胞活化差异；标记浓度不宜过高，高浓度糖脂会改变细胞膜流动性、产生非特异性毒性；探针现配现用，4℃避光短期存放。