产品说明

CY3-a-GalCer是CY3荧光标记的α-半乳糖神经酰胺糖脂探针，核心由α-GalCer糖脂抗原骨架和CY3荧光基团组成。α-GalCer作为经典iNKT抗原，依靠CD1d限制性途径激活iNKT细胞，驱动细胞因子释放，参与抗感染、*肿瘤、自身免疫等多种免疫反应；CY3属于罗丹明类荧光染料，激发波长约550 nm，发射波长约570 nm，橙红色荧光，亮度高、光稳定性良好，是生物成像中应用广的荧光标记物。标记位点经过优化，不会破坏半乳糖头部与CD1d蛋白的识别区域，鞘脂长链保留完整，保证CY3-a-GalCer保留接近天然α-GalCer的生物活性，能够正常被抗原呈递细胞摄取、加工并呈递。
本品外观为橙红色固体粉末，易溶于氯仿、DMSO，可与其他脂质共溶混合，水相中可自组装形成糖脂囊泡。对比CY5-a-GalCer，CY3处于绿光与红光之间的通道，和GFP、FITC荧光通道区分度良好，是多色成像的优选组合；CY3荧光不容易被细胞内自发荧光掩盖，适合高分辨共聚焦观察亚细胞结构。糖脂骨架化学稳定性良好，不易水解，荧光标记稳定，适合长时间活细胞成像追踪。产品经过HPLC和质谱双重质控，标记均一性高，是iNKT免疫机制、糖脂代谢研究的经典荧光探针，仅限科研使用。
产品应用
CY3-a-GalCer首要用于CD1d糖脂抗原呈递通路的亚细胞成像。将探针与树突状细胞共孵育，借助共聚焦显微镜观察CY3荧光信号在早期内体、晚期内体、溶酶体、细胞膜之间的转运动态，研究囊泡转运蛋白对α-GalCer装载CD1d的调控机制；可搭配FITC标记CD1d抗体，实现双通道共定位，直观统计抗原与CD1d的共定位系数，定量评估抗原呈递效率。
其次用于免疫突触动态成像。CY3标记的α-GalCer-CD1d复合物在免疫突触富集，可实时观测iNKT细胞和抗原呈递细胞相互作用时突触的形成、维持和解离过程，研究突触位置的信号分子募集规律。同时用于高通量流式筛选，检测不同基因敲除、药物处理条件下细胞摄取和呈递α-GalCer的变化，快速筛选调控iNKT活化的靶点。
该探针还用于糖脂代谢和膜脂动力学研究。α-GalCer属于鞘糖脂，CY3荧光可追踪其在细胞膜脂筏区域的分布，研究脂筏结构对糖脂抗原呈递的影响；也用于外泌体标记，CY3-a-GalCer嵌入外泌体膜，追踪携带糖脂抗原的外泌体在细胞间传递、远程激活iNKT细胞的过程。在小动物实验中，CY3适合淋巴结、脾脏等浅表免疫器官的组织切片荧光成像，评估抗原在免疫组织中的分布。
使用方法
储存与母液配制
产品-20℃避光密封保存，防潮，分装保存减少反复冻融。母液推荐无水氯仿或DMSO配制，避光冷冻保存；水溶液工作液现配现用，糖脂容易聚集，不建议长期存放水相溶液。全程避光操作，延缓CY3荧光光漂白。
细胞孵育成像流程
工作浓度常规50–200 nM，加入抗原呈递细胞培养基共孵育，孵育时间根据实验目的调整，短时间孵育观察膜结合，长时间孵育观察胞内转运。孵育结束PBS清洗去除游离探针，活细胞成像时使用抗淬灭培养基；固定样本使用多聚甲醛温和固定，后续进行免疫荧光染色，标记细胞器标志物，做共定位分析。
流式检测与组织切片
细胞样品收集洗涤后直接上机检测CY3荧光信号；动物取样后，组织固定、包埋、切片，避光封片采集荧光图像。
注意事项
CY3相对CY5更容易发生光漂白，成像时控制激光功率；设置空白对照组，排除游离染料污染；糖脂浓度过高会引发细胞应激、膜损伤；多色实验提前校正光谱串色；标记后的细胞样品尽量及时检测。