产品说明

Tetrazine-PEG-DOTA，四嗪-聚乙二醇-四氮杂环十二烷四乙酸，是IEDDA逆电子需求狄尔斯-阿尔德反应体系中，以四嗪为反应端的螯合功能试剂。分子由四嗪反应基团、PEG亲水连接链、DOTA大环螯合配体组成。四嗪是IEDDA反应的双烯体，专门和TCO（反式环辛烯）、环丙烯等亲双烯体发生快速、高特异性生物正交反应，反应速率快、背景低，在活体、细胞环境下都能高效进行。DOTA大环是经典多价螯合配体，可稳定螯合⁶⁸Ga、¹⁷⁷Lu、⁹⁰Y、Gd³⁺等金属离子，用于PET、SPECT、MRI成像与放射治疗研究；中间PEG链提升水溶性，缓解四嗪基团的疏水特性，同时隔离反应位点和DOTA，避免空间位阻干扰螯合。
成品一般为粉色至淡红色固体粉末（四嗪特征颜色），可溶于DMSO、DMF、甲醇和中性水缓冲液。四嗪基团对光、高温、强还原剂敏感，容易降解褪色，颜色变浅往往代表活性下降。该试剂和TCO系列配对使用，是预靶向成像、快速正交标记的核心配对原料。本产品仅用于科研，禁止人体临床使用。

产品应用
Tetrazine-PEG-DOTA作为IEDDA配对试剂，应用场景和TCO-PEG-DOTA互补。
第一，预靶向放射显像（PRIT）：先注射TCO修饰的抗体、多肽，等待靶向分子富集到肿瘤部位、清除循环本底后，再注射本试剂螯合核素，在肿瘤原位发生四嗪-TCO点击，实现肿瘤特异性显像，显著降低正常组织放射性摄取。
第二，TCO修饰生物分子的快速放射性标记：TCO化蛋白、纳米粒、外泌体，和四嗪-PEG-DOTA快速偶联，制备显像探针，适合短半衰期核素标记。
第三，活细胞原位标记：TCO代谢标记细胞表面，加入核素螯合后的Tetrazine-PEG-DOTA，快速标记细胞，用于细胞体内示踪。
第四，MRI造影剂构建，螯合Gd³⁺，得到四嗪功能化顺磁探针，标记各类TCO修饰生物材料。
第五，生物正交对照实验，和TCO端试剂配对，研究IEDDA反应在不同载体、不同组织中的体内稳定性、脱靶情况。
第六，纳米诊疗一体化载体开发，TCO修饰脂质或聚合物纳米平台，偶联四嗪-DOTA核素探针，实现成像引导放射治疗研究。

使用方法
样品储存于-20℃、避光密封，取用前回温，减少水汽接触。无水DMSO配制3–8 mM母液，避光分装，尽量避免反复冻融。 操作分为IEDDA偶联、金属螯合两步，顺序可以灵活调整：方案A，先偶联后螯合；方案B，先螯合金属，再进行点击反应（更适合短半衰期核素、预靶向体内实验）。 方案A：TCO修饰底物溶于pH 6.8–7.4缓冲液，加入Tetrazine-PEG-DOTA母液，摩尔比1.1~2:1，室温避光反应，多数样品30–90 min反应充分；超滤、透析纯化除去未反应小分子，再进行DOTA金属螯合。 方案B：先将Tetrazine-PEG-DOTA在合适条件下螯合目标核素，纯化游离金属，得到放射性探针，再用于体外标记或体内预靶向注射。 体外细胞实验可直接将探针加入含TCO标记细胞的培养基孵育；小动物预靶向模型，分两次尾静脉给药，间隔时间依据TCO靶向分子的富集动力学确定。用HPLC、TLC、DLS、BCA分别表征产物纯度、粒径、蛋白修饰效率。

注意事项
四嗪基团对紫外光、白光、高温、还原剂都敏感，见光容易降解褪色；粉末和溶液均必须全程避光操作，避光保存。颜色明显变淡、变黄提示四嗪大量降解，反应活性基本丧失，样品报废。 IEDDA反应缓冲优选pH 6.5–7.5；强酸强碱会加速四嗪水解失活。体系禁止加入DTT、TCEP、抗坏血酸等强还原性物质，还原剂会直接破坏四嗪结构。 优先控制投料摩尔比，过量四嗪探针会带来较高非特异性背景，增加纯化压力。 若采用【先螯合核素，再点击】路线，螯合条件不能剧烈，高温、低pH容易造成四嗪降解，要提前验证螯合条件对四嗪活性的影响；短半衰期核素标记后要尽快完成实验。 和TCO配对时，TCO异构失活、四嗪降解都会导致标记失败，两套试剂都需要妥善避光保存。 蛋白、抗体标记时，有机溶剂比例控制在10%以内，防止蛋白变性。放射性操作严格遵守同位素安全管理规范。本试剂只适合科研模型，不能作为临床放射药物。废弃样品避光灭活处理。