产品说明

TCO-PEG-DOTA，反式环辛烯-聚乙二醇-四氮杂环十二烷四乙酸，是基于逆电子需求狄尔斯-阿尔德反应（IEDDA）的生物正交螯合试剂。分子分为TCO（反式环辛烯）反应基团、柔性PEG亲水间隔链、DOTA大环螯合配体三部分。TCO是IEDDA反应的经典亲双烯体，可和四嗪（tetrazine）基团发生很快的生物正交反应，反应速率远高于DBCO-叠氮SPAAC体系，具备反应快、条件温和、低背景的特点，适合快速标记场景。DOTA大环配体是成熟金属螯合骨架，能够稳定螯合多种放射性核素与顺磁金属离子，适配PET、SPECT、MRI成像；PEG链提供良好水溶性，降低TCO疏水聚集，同时拉开反应位点与DOTA螯合区域的距离，减少基团间相互干扰，维持较高的螯合活性。
成品多为白色类白色粉末，可溶于DMSO、DMF、甲醇以及含水缓冲液，水溶性优于短烷基修饰的DBCO系列。TCO基团对顺式转化、氧化剂、长时间紫外光照敏感，储存稳定性弱于DBCO。该试剂是快速生物正交标记放射性探针的核心原料，适合需要快速偶联、短时标记的活体示踪体系。本产品仅用于科研实验，禁止人体临床给药、临床诊断使用。

产品应用
TCO-PEG-DOTA优势是IEDDA超快点击反应，核心应用围绕快速标记探针开发。
第一，四嗪修饰靶向分子的放射性标记：四嗪化抗体、多肽、纳米载体，和TCO-PEG-DOTA快速偶联，短时间完成探针合成，特别适合短半衰期核素（如⁶⁸Ga，半衰期68 min），减少标记耗时带来的核素衰变损失。
第二，预靶向放射免疫显像（PRIT）研究：先注射四嗪修饰抗体，等待抗体在肿瘤富集、本底清除后，再注射TCO-PEG-DOTA-核素探针，在肿瘤部位原位发生IEDDA点击，大幅降低全身本底，提升肿瘤/正常组织比值，是预靶向成像主流原料。
第三，活细胞快速标记：四嗪修饰细胞表面，加入TCO-PEG-DOTA快速反应，短时间完成DOTA螯合模块接入，用于细胞活体追踪。
第四，MRI造影探针制备，螯合Gd³⁺得到TCO功能化顺磁造影剂，用于快速标记四嗪修饰生物材料。
第五，纳米药物快速表面功能化，四嗪改性脂质体、聚合物纳米粒，快速接入DOTA螯合位点，一步获得可核素标记的纳米显像载体。
第六，动力学研究，对比IEDDA与SPAAC两种正交反应的标记效率、体内稳定性、非特异性结合差异。

使用方法
试剂-20℃避光干燥保存，取用前充分回温。无水DMSO配制5–10 mM母液，避光分装，尽量减少反复冻融。 反应流程分为IEDDA偶联、金属螯合两步。 IEDDA反应：底物为四嗪修饰多肽/蛋白/纳米材料，溶于pH 6.5–7.5缓冲液；TCO-PEG-DOTA与四嗪摩尔比1.2~2:1投料，室温避光反应，该反应速率很快，多数体系10–60 min即可反应完全，无需长时间孵育。反应结束，超滤、透析、SEC纯化除去未反应小分子。 螯合步骤：纯化后的TCO-PEG-DOTA修饰产物，按照对应核素的标准DOTA螯合方案操作。⁶⁸Ga一般pH3.5–4.0醋酸缓冲加热；Lu177、Y90可在近中性条件螯合。螯合后固相萃取纯化，HPLC/TLC检测放射化学纯度。 预靶向动物实验采用分两次给药策略：先给四嗪修饰靶向分子，间隔合适时间，再注射核素标记TCO-PEG-DOTA探针，在体内实现原位点击。所有操作避光，减少TCO异构失活。

注意事项
TCO（反式环辛烯）很易异构化为顺式环辛烯，顺式产物完全丧失和四嗪的反应活性，这是本试剂很主要的失效原因。因此必须严格-20℃避光、隔绝氧化剂保存，避免长时间室温放置、强光照射。 IEDDA反应速率很快，投料时不要一次性大量过量，容易造成后续纯化压力；缓冲体系避免强氧化剂、高浓度自由基，会加速TCO顺式异构化。 反应pH窗口适中，pH低于6或者高于8.0会加速TCO失活，优先选用pH 7.0左右缓冲液。体系避免高浓度巯基还原剂。 预靶向实验对时间窗口要求严格，需要提前做动物药代预实验，确定两次给药间隔；游离核素必须充分去除，否则本底偏高。 相比DBCO系列，TCO试剂保质期更短，储备液不适合长期存放，建议现配现用。蛋白底物标记时控制有机溶剂比例，防止蛋白变性。放射性标记全程遵守同位素管理规范。 TCO-PEG-DOTA不适合长时间孵育体系，长时间放置会逐步异构失活；标记完成的探针尽快上样检测或给药。废弃物按照生化危险品规范处理，本产品不可直接用于人体。