产品说明

DBCO-DOTA-PEG5-C4，二苯并环辛炔-DOTA-五聚乙二醇-C4，属于SPAAC无铜点击螯合试剂，结构为DBCO反应基团-PEG5间隔链-C4丁基连接臂-DOTA大环螯合配体。和C6同系列产品相比，区别仅在于烷基连接臂是C4短丁基链，整体分子更紧凑，脂溶性略低、水溶性相对更好，分子柔性、空间位阻特征和C6版本形成互补。DBCO（二苯并环辛炔）是无铜点击化学经典基团，能与叠氮基团在生理条件下高效发生环加成，无细胞毒性、不破坏蛋白多肽生物活性；DOTA大环配体具备优良的多金属螯合能力，可稳定结合⁶⁸Ga、¹⁷⁷Lu、⁹⁰Y、¹¹¹In、Gd³⁺等核素与顺磁离子，是放射性药物、MRI造影很主流大环配体之一。
PEG5短亲水链起到隔离、增溶作用，降低DBCO的疏水聚集倾向；C4短烷基连接臂缩短DBCO与DOTA之间距离，适合需要紧凑分子构型、追求更高局部螯合密度的修饰场景。成品多为白色固体粉末，易溶于无水DMSO、DMF、乙腈，在中性水缓冲液有一定溶解度，HPLC纯度高，结构均一，批次间活性稳定。该试剂适合空间拥挤的修饰体系，比如高密度修饰的纳米颗粒、短肽、小分子配体。本产品仅用于科研，不可用于人体给药、临床显像制剂。
产品应用
DBCO-DOTA-PEG5-C4主打紧凑构型的点击螯合标记，和C6版本形成搭配筛选。
第一，短肽靶向探针合成，对于分子量小、结构紧凑的靶向肽（RGD、NGR等），C4短连接臂分子尺寸更小，标记后对肽的靶向亲和力干扰更低，适合制备⁶⁸Ga PET显像肽探针。
第二，高密度纳米载体修饰，在叠氮化脂质纳米粒、聚合物纳米球表面高密度偶联DOTA，短C4链不容易出现空间缠绕、位阻累积，提升单位颗粒螯合容量。
第三，活细胞代谢标记，代谢叠氮标记细胞后进行点击标记，短链分子穿透细胞膜表面糖萼的阻力更小，标记效率更高。
第四，蛋白、抗体片段（Fab、scFv）放射性标记，相比长烷基版本，C4构型对蛋白抗原结合位点的干扰更小，有利于保留靶向活性。
第五，多模态探针构建，螯合Gd作为MRI信号源，结合荧光或核素，用于体外细胞成像、小动物多模态示踪。
第六，生物正交化学对照实验，和C6烷基版本对照，研究连接臂长度对探针亲和力、体内清除、肝脏摄取的影响，优化探针药代行为。
使用方法
样品-20℃避光密封保存，取用前室温回温，防止水汽进入。用无水DMSO配制成2–5 mM避光母液，分装冻存，减少反复冻融。
第一步：无铜点击偶联。叠氮修饰底物溶于pH7.2左右PBS缓冲液；DBCO-DOTA-PEG5-C4母液缓慢加入，摩尔比控制在DBCO:叠氮 = 1.11.8:1，体系DMSO体积分数尽量≤10%，室温避光振荡反应6–12 h。反应结束，超滤、透析或者HPLC纯化，除去未反应小分子，收集DOTA修饰产物。
第二步：金属螯合。根据目标金属离子设置条件：⁶⁸Ga常用醋酸缓冲pH3.54.0，加热螯合；¹⁷⁷Lu、Gd³⁺按照文献优化pH与温度。螯合完成后用固相萃取柱分离游离金属，放射性HPLC或TLC检测放射化学纯度。 对于短肽底物，可选用HPLC直接监测点击产物峰；纳米颗粒样品用DLS、zeta电位辅助表征修饰效果。标记完成的探针尽快开展细胞或动物实验，放射性探针不宜久放。
注意事项
储存要求：-20℃、避光、干燥密封，优先氮气保护；DBCO遇水、强光会缓慢降解，活性下降。开盖务必等样品回温，避免水汽凝结。 C4版本分子更紧凑，在高浓度下更容易发生分子间相互聚集，因此点击反应投料浓度不宜过高，建议底物浓度梯度优化。虽然无铜点击不需要铜，但反应体系避免DTT、TCEP、高浓度巯基类还原剂，还原剂会破坏DBCO结构。 DOTA螯合对pH敏感，不同核素很优螯合pH差异巨大，不可直接套用同一条件；游离金属离子必须彻底去除，否则背景信号高、产生细胞毒性。 短连接臂优势是位阻小，但如果底物空间结构大（完整IgG抗体），过短连接臂可能造成DOTA被蛋白遮蔽，螯合效率下降，这种场景优先选用C6版本。 蛋白、抗体标记全程冰上或常温避光，避免高温，防止生物分子失活。放射性操作严格遵守同位素安全规范。废弃物按照生化污染物、放射性废物分类处理。本试剂仅科研模型使用，不能作为临床显像药物原料。