产品说明

MC-VC-PAB-NH2・TFA 盐，全称马来酰亚胺己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄胺三氟乙酸盐，是 MC-VC-PAB 骨架的氨基端衍生物，PAB 末端不再是苄醇、PNP、苄氯，而是伯胺（-NH2），以 TFA 盐形式稳定存在。它的反应方向和前面几款反过来：绝大多数 VC 连接子是 PAB 端活化接毒素；而该分子 PAB 端是游离伯胺，用来和毒素上的羧酸、琥珀酰亚胺酯、酰氯进行酰胺缩合，适配带羧基的毒素分子。很多毒素末端是羧酸，不是伯胺，无法用 PNP 酯、苄氯偶联，这款带伯胺的 VC 连接子就是为这类羧基毒素设计的正交工具。MC 端依然保留马来酰亚胺，用于后续和抗体巯基加成；Val-Cit-PAB 酶切释放单元完整保留，剪切之后 PAB 消除释放毒素。TFA 成盐是为了提升该伯胺中间体的稳定性与溶解性，游离伯胺容易氧化、分子内副反应，TFA 盐形式更适合长期储存和称量，使用时用 DIPEA 原位中和释放游离胺参与缩合反应。该连接子拓展了 VC 体系的底物谱，面向羧基类毒素、羧基修饰的荧光基团、多肽毒素，是一套反向偶联的工具分子。

作用机理与结构特点

体内释放机制不变：马来酰亚胺-硫醚锚定抗体，循环稳定；溶酶体 Cathepsin B 剪切 Val-Cit，PAB 1,6-消除释放毒素。化学反应逻辑反转：常规 VC-PNP 是连接子活化（亲电位点）+ 毒素氨基（亲核）；MC-VC-PAB-NH2 是连接子带亲核伯胺 + 毒素羧基活化（HATU/OSu 酯），形成酰胺键。酰胺键在血浆中稳定性高于氨基甲酸酯，部分研究用该骨架降低 payload 在循环中的非特异性断裂，提升 ADC 血浆稳定性。TFA 盐本身不参与反应，加 DIPEA 中和之后释放游离-NH2；体系碱度不能过高，一方面防止 MC 马来酰亚胺开环，另一方面避免瓜氨酸侧链副反应。PAB-NH2 的自消除动力学和 PAB-O-CO-PNP 略有差异，消除速率略慢，会改变毒素释放速度，适合需要放缓胞内释放、降低爆释毒性的 ADC 设计。

主要应用方向

第一，偶联带有游离羧基的细胞毒素、羧基化荧光染料、羧基修饰靶向肽，通过 HATU、EDCI、NHS 酯缩合形成酰胺键 payload，弥补 PNP 路线只能接氨基毒素的局限。第二用于构建酰胺键型 VC-payload，对比氨基甲酸酯键 payload，评估键型对血浆稳定性、溶酶体释放速率、旁观者效应的影响。第三用于双功能探针合成，PAB-NH2 接羧基荧光团，MC 标记蛋白巯基，用于细胞蛋白酶示踪。第四用于 PDC、自组装多肽前药，利用酰胺键高稳定性，提升前药循环半衰期。该试剂 PAB 端是伯胺，优先对接活化羧基，不能直接对接氨基毒素。

详细使用指南

溶剂无水 DMF/DMSO；使用前加入当量 DIPEA 中和 TFA 盐，释放游离伯胺，DIPEA 摩尔量略高于 TFA，pH 控制 7.2–8.0，禁止高碱。毒素羧基活化方案：可以提前做成 NHS 酯，再和该连接子胺偶联；或者原位 HATU 缩合，毒素羧酸 + 连接子胺 + HATU/HOAt。投料毒素（活化羧基）: 连接胺 = 1.1:1，室温避光反应 2–4 h。HPLC 监测，重点监控 MC 开环杂质。酰胺键产物稳定性高，纯化后冻干，后续直接用于抗体巯基偶联，醋酸缓冲 pH 6.0–6.5。中和 TFA 这一步是关键：如果不中和，质子化胺没有亲核活性，缩合完全不发生；碱加过量直接破坏马来酰亚胺。

储存与质控注意事项

-20℃避光干燥密封；TFA 盐吸湿性中等，防潮。质控：HPLC、质谱、游离胺比例、MC 开环杂质。中和后的游离胺不要长时间存放，现中和现反应。