产品说明

DOTA-NHS ester，DOTA活性酯，是很基础、应用很广的氨基反应型DOTA单功能螯合试剂，结构为DOTA大环的一个羧基活化成NHS活性酯（N-羟基琥珀酰亚胺酯），其余三个羧基保留，用于螯合金属离子。DOTA大环是经典四氮杂环十二烷四乙酸螯合骨架，可稳定螯合Gd³⁺、Eu³⁺、Tb³⁺以及⁶⁴Cu、¹⁷⁷Lu、²²⁵Ac等放射性核素，螯合常数高，生理环境下金属解离风险低；活化后的NHS酯基团，在弱碱性条件下可特异性和伯氨基（-NH₂）发生酰胺化反应，共价连接多肽、蛋白、抗体、氨基修饰纳米材料，是DOTA和含氨基生物分子直接偶联的基础工具，早于各类点击型DOTA衍生物，是放射性探针、MRI造影剂合成的源头原料。
本品外观为白色类白色固体粉末，溶于DMSO、DMF，在纯水中很易水解失活，因此水溶液体系不能久放；反应不需要点击化学的特殊配对基团，只要底物带有伯氨基即可偶联，通用性很强；缺点是反应选择性弱，蛋白上多个赖氨酸残基氨基都会随机发生修饰，容易造成多位点标记，影响蛋白活性，修饰产物是标记数目不均一的混合物；NHS酯对pH敏感，很优反应pH 7.5–8.5，酸性条件下几乎不反应，碱性过高水解速度大幅加快。产品纯度稳定，HPLC质控，是各类DOTA衍生探针合成的上游中间体，绝大多数DOTA-PEG-NHS、DOTA点击试剂都由DOTA-NHS ester衍生而来，广用于多肽、抗体、蛋白金属标记，仅限科研使用。

产品应用
DOTA-NHS ester很核心用途是多肽、抗体、蛋白的直接DOTA修饰。RGD、奥曲肽等靶向多肽含有氨基，在弱碱性体系下和DOTA-NHS ester反应，将DOTA共价接枝到多肽上，后续螯合放射性核素或者钆离子，制备靶向放射性显像药物、靶向MRI造影剂，是小动物肿瘤显像、放射性治疗研究很主流方案。
其次用于氨基修饰纳米材料、脂质体、水凝胶表面修饰。氨基化LNP、脂质体、二氧化硅纳米颗粒、氨基葡聚糖等材料，和DOTA-NHS ester反应，在材料表面引入DOTA螯合位点，后续螯合稀土离子构建时间分辨荧光探针，螯合钆构建磁共振造影纳米载体；也用于制备免疫检测TRF探针，DOTA螯合Eu³⁺后标记抗体，开发时间分辨荧光免疫分析试剂。
同时它是合成各类DOTA功能衍生物的基础原料。DOTA-NHS ester可以和氨基-PEG-DBCO、氨基-PEG-叠氮、氨基-PEG-BCN等中间体酰胺化，合成前面几款DOTA点击试剂；也用于固定组织样本、细胞表面氨基标记，实现组织切片金属染色成像。该试剂操作门槛低，不需要配套点击底物，适合新手快速搭建金属标记体系，但不适合对标记位点单一性要求很高的蛋白样品。

使用方法
储存与溶解
产品-20℃密封避光干燥保存，防潮至关重要，水汽会快速水解NHS酯；分装密封保存；母液必须用无水DMSO或者无水DMF现配，禁止用水配制母液，DMSO母液冷冻避光保存，建议两周内用完。
氨基偶联反应操作
将含氨基底物（多肽、抗体）溶于pH7.5–8.5的碳酸氢钠缓冲液；DOTA-NHS ester溶于无水DMSO，按照投料比缓慢滴加至水相体系，DOTA-NHS酯摩尔过量1.5–3倍；室温避光反应1–4 h；反应结束加入甘氨酸淬灭剩余活性酯，之后透析、超滤或者HPLC纯化除去游离DOTA。蛋白修饰全程温和，避免剧烈震荡。
金属螯合步骤
偶联纯化完成之后，再进行金属螯合；醋酸铵缓冲pH5.0–6.0孵育螯合稀土或者放射性核素；固相萃取或者HPLC去除游离金属离子。不建议先螯合金属再做NHS偶联，金属离子会干扰活性酯稳定性，增加副反应。

注意事项
NHS酯遇水快速水解，所有操作尽量减少在水相中的停留时间；严格控制反应pH；该反应随机修饰氨基，容易造成蛋白失活，位点特异性标记优先选用DOTA点击系列产品；粉末防潮；淬灭必须使用甘氨酸；标记产物纯化后尽快螯合金属使用。