产品说明

DOTA-PEG-BCN是BCN环辛炔修饰的PEG化DOTA大环螯合试剂，分子由DOTA大环螯合单元、亲水PEG间隔链、BCN（双环[6.1.0]壬炔）张力炔基三部分组成。DOTA大环可以稳定螯合Gd、Eu、Tb以及各类放射性核素，形成稳定金属配合物，适配MRI、放射性显像、稀土荧光检测；PEG链提升水溶性，隔开螯合位点与反应手柄，降低空间位阻；BCN属于紧凑型无芳香环张力环炔，可和叠氮基团发生无铜SPAAC点击反应，和DBCO是同类型SPAAC手柄，但结构差异带来完全不一样的理化特性：BCN分子更小、疏水性更低、在谷胱甘肽等胞内还原环境稳定性显著优于DBCO，不容易被胞内巯基进攻降解；SPAAC反应后产物单一，不会生成非对映异构体混合物，产物均一性更好，对后续色谱纯化、质谱表征、生物制剂开发非常友好，缺点是和叠氮的二级反应速率略低于DBCO。
本品外观为白色固体粉末，易溶于水、DMSO、甲醇、PBS缓冲液，PEG链长规格丰富，可按需调整间隔长度。对比DOTA-PEG-DBCO，BCN无苯环结构，分子脂溶性更低，标记后生物分子不容易聚集，体内非特异性吸附更低；对比DOTA-PEG-Azides，BCN是炔基端，和叠氮底物配对反应，属于正交点击体系。该试剂适合需要高产物均一性、胞内长时间标记、降低探针疏水毒性的场景，广用于靶向放射性探针、MRI造影剂、胞内生物分子原位标记，仅限科研使用。

产品应用
DOTA-PEG-BCN很突出的应用场景是胞内环境、长时间活细胞无铜点击标记。BCN耐受胞内高GSH还原环境，在细胞内孵育数小时仍然保持点击活性，远优于DBCO；将DOTA-PEG-BCN螯合金属离子后，和细胞内代谢引入的叠氮修饰蛋白、糖链、核酸进行原位标记，实现胞内靶点长时间追踪，用于蛋白转运、细胞器示踪、胞内信号通路金属成像研究。
其次用于高均一性靶向放射性药物、MRI造影剂合成。BCN点击生成单一立体异构体，产物组分简单，减少异构体分离难度，适合需要严格质控的靶向多肽、抗体片段放射性偶联物制备；螯合钆离子后构建靶向MRI造影剂，螯合放射性镥、铜核素制备诊疗一体化探针，用于肿瘤靶向显像与治疗研究。
同时用于多生物正交标记体系构建。BCN/叠氮SPAAC可以和环丙烯-四嗪反应正交联用，两套点击体系互不干扰，实现同一个样本内两个靶点的双色/双金属标记；也用于纳米载体、水凝胶表面修饰，在水凝胶内部原位锚定DOTA螯合位点，用于金属离子缓释、成像基质制备。另外，BCN低疏水特性，适合抗体、蛋白等敏感生物大分子修饰，降低修饰后蛋白沉淀失活风险。

使用方法
储存与溶解
产品-20℃避光密封干燥保存；BCN对强酸、高浓度TCEP敏感，避免长期接触强还原剂；母液DMSO配制避光冷冻保存，水溶液缓冲液pH 6.5–7.5短期使用。
金属螯合流程
优先先螯合金属离子，再进行点击偶联；醋酸铵缓冲液pH 5.0–6.0条件下，DOTA-PEG-BCN和金属离子混合孵育，HPLC或者固相萃取纯化除去游离金属，确认螯合完全。BCN环炔在螯合常用弱酸性条件下稳定性良好，一般不会提前分解。
SPAAC点击偶联操作
和叠氮修饰多肽、抗体、纳米材料按照摩尔比1.2:1投料，中性PBS缓冲体系室温避光反应4–8 h；BCN反应速率慢于DBCO，可适当延长孵育时间提升标记效率；反应结束超滤、透析除去未反应原料。活细胞标记时，提前用PBS清洗细胞去除培养基内巯基类组分，减少副反应。

注意事项
BCN反应速率偏慢，不要盲目降低投料比例；优先用于胞内、长时间标记、需要单一产物的实验；如需快速标记叠氮底物优先选择DBCO系列；操作避光；设置未叠氮标记对照组；标记蛋白全程温和条件，避免剧烈搅拌造成蛋白变性。