产品说明

DBCO-DOTA-PEG5-C6，全称二苯并环辛炔-DOTA-五聚乙二醇-C6烷基连接臂，是一款叠氮点击化学（SPAAC）型DOTA螯合探针前体。分子由三大部分构成：末端DBCO（二苯并环辛炔）、中间PEG5亲水间隔链、C6烷基连接臂以及螯合头部DOTA（1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸）。DBCO是经典无铜点击反应基团，可在无铜、生理温和条件下，和叠氮（-N3）标记的蛋白、多肽、纳米材料、细胞表面发生环加成反应，不需要铜离子催化，规避铜离子带来的蛋白损伤、细胞毒性问题。DOTA是成熟的大环螯合配体，对多种金属离子具备高稳定螯合能力，可螯合Ga⁶⁸、Lu¹⁷⁷、Y⁹⁰、In¹¹¹、Gd³⁺等放射性金属或者顺磁金属离子，广用于PET、SPECT、MRI造影。
PEG5短链亲水、柔性好，降低DBCO的空间位阻，提升点击反应效率；C6烷基作为疏水连接段，调节分子脂水分配系数，同时隔离DOTA螯合区域与DBCO反应端，避免基团之间相互干扰、降低螯合效率。成品一般为白色或类白色固体粉末，可溶于DMSO、DMF、甲醇、乙腈等有机溶剂，在中性缓冲液中具有一定水溶性。该产物结构明确，纯度高，点击活性稳定，DOTA螯合位点保留完整，是构建点击型金属螯合示踪探针、靶向放射性探针的核心原料。本产品仅限科研实验，禁止直接用于人体显像、临床给药、药物制剂。

产品应用
DBCO-DOTA-PEG5-C6核心围绕无铜点击+金属螯合探针合成两大方向。
第一，叠氮修饰生物分子的放射性标记：叠氮化多肽、抗体、纳米载体、外泌体、多糖，通过SPAAC反应偶联DBCO-DOTA-PEG5-C6，再螯合放射性核素，制备PET/SPECT靶向显像探针，用于活体肿瘤、炎症、淋巴结示踪。
第二，MRI造影剂构建，螯合Gd³⁺后，得到可点击标记的顺磁造影分子，用于细胞标记、蛋白示踪、组织磁共振成像研究。
第三，活细胞表面标记：先对细胞进行代谢叠氮标记，再用本试剂点击偶联，实现活细胞无创标记，后续金属成像追踪细胞体内迁移、归巢行为。
第四，纳米材料功能化修饰：叠氮改性脂质体、LNP、二氧化硅纳米粒、水凝胶，引入DOTA螯合位点，赋予纳米载体核素标记能力，用于多模态成像。
第五，双功能探针开发，联合荧光、核素双标记，实现荧光显微镜与PET/SPECT多模态对照成像。
第六，靶向配体库高通量构建，快速将DOTA螯合模块接入各类叠氮靶向分子，筛选高特异性显像探针。

使用方法
样品自-20℃取出，室温充分回温后开盖，减少水汽吸入。优先使用无水DMSO配制1–10 mM储备液，避光保存；储备液建议分装小份，避免反复冻融。 操作分两大阶段：点击偶联、金属螯合。
第一阶段SPAAC点击反应：将叠氮修饰底物（多肽、蛋白、纳米颗粒）溶于pH 7.0–7.4无铜PBS缓冲液；按DBCO与叠氮摩尔比1.2~2:1加入DBCO-DOTA-PEG5-C6的DMSO母液，体系中DMSO含量建议控制在10%以内，室温避光反应4–16 h。反应结束，用透析、超滤、SEC凝胶过滤除去未反应小分子，纯化得到DOTA修饰产物。
第二阶段金属螯合：根据目标金属离子选择对应螯合条件。如⁶⁸Ga标记，通常在醋酸钠缓冲pH 3.5–4.0、70–95℃加热螯合；Gd³⁺、Lu¹⁷⁷可按文献优化温度与pH。螯合完成后，固相萃取或者HPLC纯化游离金属离子，TLC、放射性HPLC验证标记率。 探针制备完成后，可直接用于体外细胞孵育或者小动物活体成像实验。未用完母液避光冷冻保存。

注意事项
DBCO基团对强光、长时间高温敏感，样品储存条件为-20℃、密封避光、干燥防潮，长期保存建议充氮气。开盖前必须回温，防止冷凝水进入引发水解。 SPAAC反应不需要铜催化剂，体系严禁额外加入铜离子；蛋白底物体系避免重金属、强氧化剂，防止生物分子失活。缓冲pH非常关键，中性至弱偏酸环境更适合DBCO点击；强碱性环境会加速DBCO降解，降低反应活性。 DOTA螯合效率严格依赖pH、温度、金属离子种类，不同核素螯合条件差异大，正式实验前必须做螯合预实验；未螯合游离金属离子毒性高，纯化步骤不可省略。 DBCO投料不宜过量太多，过量未反应试剂会竞争金属离子，降低标记率。蛋白类底物点击时，控制有机溶剂比例，高浓度DMSO容易造成蛋白变性。 所有放射性标记操作，必须在合规放射性实验场所、配套防护条件下进行，遵守同位素管理规范。组装好的探针稳定性有限，放射性探针一般标记后尽快测试。废弃样品按生化、放射性废弃物分类处理。本试剂仅科研使用，不能直接作为临床显像剂。