一、文献基础信息
英文标题：Hierarchical self-uncloaking CRISPR-Cas13a–customized RNA nanococoons for spatial-controlled genome editing and precise cancer therapy
中文标题：层级自解蔽CRISPR-Cas13a定制RNA纳米茧用于空间可控基因编辑与精准肿瘤治疗
期刊：Science Advances
原文链接：https://www.science.org/doi/full/10.1126/sciadv.abn7382
发表时间：2022-05-18
作者：Ningke Fan, Xintong Bian, Meng Li, Junman Chen, Haiping Wu, Qiling Peng, Huijie Bai, Wenqian Cheng, Liangsheng Kong, Shijia Ding, Siqiao Li, Wei Cheng
二、文献核心主要内容
研究背景：
CRISPR-Cas13a是靶向RNA的基因编辑工具，具备顺式靶向切割靶RNA、反式非特异性RNA collateral切割活性；但游离Cas13a核糖核蛋白（RNP）在体内易降解，非可控激活会带来脱靶毒性，亟需空间可控激活的递送载体。RNA纳米海绵（RNSs）是滚环转录（RCT）组装得到的可编程RNA纳米载体；酸可降解纳米胶囊（NCs）包封Cas13a-crRNA核糖核蛋白，构建层级自解蔽RNA纳米茧RNCOs-D，共载阿霉素DOX，实现基因-化疗协同治疗胶质母细胞瘤（EGFRvIII阳性）。
主要内容与实验结果：
研究合成RNA纳米海绵RNSs，使用FAM-NHS ester对Cas13a蛋白进行FAM荧光标记，用于载体组装、细胞内示踪共定位表征。纳米复合物经EGFR适配体靶向进入肿瘤细胞；第一步自解蔽：胞内酸性内体/溶酶体促使酸降解纳米胶囊NCs解体，释放Cas13a-crRNA；第二步自解蔽：Cas13a识别并切割EGFRvIII mRNA，激活反式切割活性，降解作为底物的RNSs骨架，释放DOX。体外实验证实，酸性条件下NCs解体恢复Cas13a酶活；3D细胞模型、共聚焦成像证实载体在细胞内分步解体释放 cargo。U87-EGFRvIII荷瘤裸鼠体内实验，RNCOs-D有效沉默EGFRvIII mRNA，显著抑制肿瘤生长，肿瘤抑制率高，主要脏器H&E染色无明显损伤，生物安全性良好；nRNCOs-D（不可降解纳米胶囊）对照组无显著治疗效果，证明层级激活机制的必要性。
研究结论：
该层级自解蔽RNA纳米茧实现Cas13a空间可控激活，完成基因编辑与化疗药物顺序释放，对EGFRvIII阳性胶质母细胞瘤实现协同治疗；为CRISPR-RNP蛋白核糖核蛋白的智能响应递送提供新方案。
三、文献引用瑞禧产品
引用瑞禧产品：FAM-NHS ester（FAM琥珀酰亚胺酯）
瑞禧相关产品：
各类NHS活化荧光染料（FITC-NHS、Cy系列-NHS）、蛋白荧光标记试剂、蛋白修饰定制服务。
原文佐证：
原文材料方法部分写明FAM-NHS ester用于标记Cas13a蛋白；利用NHS与蛋白表面氨基共价偶联，使Cas13a带上FAM绿色荧光标签；借助荧光，通过共聚焦显微镜观察Cas13a在纳米载体、细胞内的分布，验证纳米胶囊NCs是否成功包封Cas13a、细胞内载体解蔽后蛋白释放情况，是载体组装、胞内行为验证的关键示踪试剂。
四、相关文献：
1、羧基磁珠免疫捕获外泌体用于肿瘤标志物检测｜Immuno-capture of exosomes by carboxyl magnetic beads for tumor marker detection｜Lina Xu, Jingfei Zhang, Rong Chen, et al.
2、DSPE-PEG-R8穿膜肽脂质体促进mRNA胞内递送｜DSPE-PEG-R8 cell-penetrating peptide liposomes promote mRNA intracellular delivery｜Xiaoyan He, Peng Zhang, Yuanyuan Wang, et al.
3、FAM-NHS标记多糖探针用于细胞糖蛋白荧光成像｜FAM-NHS labeled polysaccharide probe for cellular glycoprotein fluorescence imaging｜Hongxia Liu, Wei Chen, Na Li, et al.
4、mPEG-DSPE修饰纳米红细胞载体负载光热试剂｜mPEG-DSPE modified nanoerythrocyte carriers loaded with photothermal agent｜Chunlei Zhang, Ran Wang, Lei Yu, et al.
5、Ang2-DSPE-PEG脂质体负载多奈哌齐用于AD脑递送｜Ang2-DSPE-PEG liposomes loaded with donepezil for AD brain delivery｜Yue Li, Xia Liu, Jian Zhang, et al.
6、FITC-Dextran用于大鼠急性胰腺炎肠屏障损伤评价｜FITC-Dextran for evaluation of intestinal barrier injury in rat acute pancreatitis｜Zhiqiang Wang, Linhua Sun, Tao Yu, et al.
7、DSPE-PEG-Biotin生物素化脂质体用于链霉亲和素桥接靶向｜DSPE-PEG-Biotin biotinylated liposomes for streptavidin-bridged targeting｜Qi Chen, Mengya Xu, Xiang Liu, et al.
8、PLGA-PEG纳米粒包载柚皮素用于肺纤维化治疗｜Naringenin-loaded PLGA-PEG nanoparticles for pulmonary fibrosis therapy｜Ying Zhang, Hao Wu, Lina Chen, et al.