产品说明

简单描述

Sulfo-CY5 maleimide是水溶性巯基反应型Sulfo-CY5荧光染料，专门用于标记蛋白、多肽上半胱氨酸的巯基（-SH）。分子融合磺化Cy5荧光骨架与马来酰亚胺活性基团，磺酸根保证水相良好溶解，不需要DMSO助溶；中性pH条件下马来酰亚胺可以和巯基发生迈克尔加成，生成稳定硫醚键，标记选择性优于氨基标记染料。远红光Cy5荧光背景低、检测灵敏，适配流式细胞、免疫荧光、蛋白凝胶荧光扫描、活体成像。该染料是抗体半胱氨酸标记、ADC中间体荧光示踪、多肽巯基修饰、膜蛋白标记的常用试剂，尤其适合容易被有机溶剂变性的酶、重组蛋白样本，弥补脂溶性马来酰亚胺染料水相兼容性差的短板。

基本信息

中文名称：磺基-CY5马来酰亚胺
英文名称：Sulfo-CY5 maleimide，Sulfo-Cyanine5 maleimide CAS号：2242791-82-6
类别：水溶性巯基特异性荧光标记染料
外观：深蓝色固体粉末 纯度：≥95%
光谱参数：λabs=649 nm，λem=672 nm
消光系数：271000 L·mol⁻¹·cm⁻¹
溶解性：易溶于水、DMSO、DMF
反应基团：马来酰亚胺，特异性与巯基反应 反应pH：6.5–7.2
储存条件：-20℃避光密封干燥保存
保质期：妥善储存6个月

结构与作用原理

分子分为磺化Cy5荧光单元、连接臂、马来酰亚胺五元环活性端。磺化Cy5提供荧光信号与水溶性，抑制染料聚集淬灭；马来酰亚胺是巯基特异性
反应基团，在中性偏弱酸环境下，优先和巯基发生加成，和氨基反应活性很低，大幅降低非特异性标记。pH高于7.5时马来酰亚胺容易发生水解开环失活，是该试剂关键的特性。标记完成后形成稳定硫醚键，偶联产物荧光稳定，pH耐受范围宽。染料本身不具备靶向性，仅作为报告基团，用来示踪带有游离巯基的生物大分子；对于抗体，可以通过TCEP选择性还原链间二硫键释放巯基，再用该染料标记，实现半胱氨酸位点荧光修饰。

使用说明

1. 母液配制：水或者无水DMSO配制1–5 mM母液，避光现配现用，避免反复冻融。

2. 蛋白巯基标记方案：蛋白用TCEP还原二硫键，脱除过量TCEP（TCEP会消耗马来酰亚胺），更换缓冲液至pH6.5–7.2 PBS；染料按1.1–1.5 eq加入，室温避光反应1–2 h。

3. 纯化检测：超滤脱除游离染料；HPLC、质谱测定标记比例，SEC-HPLC监测蛋白聚集情况。

4. 凝胶与成像：标记产物可直接用于SDS-PAGE荧光扫描、共聚焦、流式检测，使用Cy5通道采集信号。

5. 对照设置：设置无染料对照组、无巯基蛋白对照组，排除染料非特异性吸附。

6. 关键提醒：严禁在高pH条件长时间孵育；体系中不能残留过量还原剂。

储存与安全注意事项

防潮避光低温保存，回温后开盖。马来酰亚胺遇水、强碱易水解，母液不宜久放。通风橱操作，做好防护，仅用于科研。废液按荧光危废处理。

应用场景与优势

用于蛋白、抗体、多肽巯基的水溶性荧光标记，适合对有机溶剂敏感的蛋白样本；常用来荧光标记ADC中间体、还原型抗体，示踪偶联过程，也用于巯基修饰纳米材料、膜蛋白标记。相比脂溶性Cy5马来酰亚胺，水相兼容性更好，不容易造成蛋白变性沉淀，标记背景可控，是巯基标记体系里非常成熟的远红光荧光试剂。