产品说明

Fmoc-Val-Cit是固相多肽合成工艺路线下的基础二肽砌块，是Val-Cit体系很氨基保护型前体，广用于Fmoc固相合成策略。分子N端由Fmoc（芴甲氧羰基）保护，C端为瓜氨酸游离羧基；Fmoc属于碱敏感保护基，在20%哌啶/DMF条件下快速脱除，释放游离伯胺，而酸性条件下稳定，和Boc保护基形成互补。中间Val-Cit二肽序列保持组织蛋白酶B特异性酶切特性，血浆中稳定，溶酶体蛋白酶触发断裂。该试剂是合成Fmoc-Val-Cit-PAB、Fmoc-Val-Cit-PAB-PNP、Fmoc-Glu(Boc)-Val-Cit-PAB-PNP等一系列高阶连接子的上游母核原料，也是固相肽树脂上延伸Val-Cit序列的标准单体。和m-PEG3-Val-Cit区别是N端为可脱保护的Fmoc氨基，不是甲氧基封端，因此适合逐步固相延伸，在二肽前端继续接入谷氨酸、其他氨基酸、Boc保护胺基侧链等复杂结构，拓展连接子多样性。该试剂性状多为白色粉末，适合固相多肽合成体系，在DMF、NMP中溶解性良好，在纯水溶解度偏低。Fmoc基团紫外特征吸收在301 nm、265 nm，非常方便用HPLC、UV在线监测脱保护和偶联反应进度，固相合成平台几乎都采用该砌块搭建Val-Cit骨架。

主要应用方向

第一，固相多肽合成（SPPS）的标准原料，在Rink酰胺树脂、Wang树脂上逐步偶联，延伸PAB、PNP、Boc保护二胺、Boc-Glu等单元，搭建各类Fmoc系列ADC连接子中间体，是Fmoc路线合成Val-Cit类linker的起点。第二，液相合成路线，以Fmoc-Val-Cit为原料，C端羧基活化后与PAB-OH缩合，制备Fmoc-Val-Cit-PAB-OH，再进一步活化成PNP活性酯，形成完整payload偶联砌块。第三，多肽文库构建、酶底物筛选文库合成，在固相上批量合成变体Val-Cit二肽，改造氨基酸侧链，筛选组织蛋白酶B亲和力更高或者选择性更强的酶切序列。第四，用于可降解多肽水凝胶、酶响应多肽材料合成，将Val-Cit序列引入多肽交联骨架，实现蛋白酶触发凝胶降解。第五，教学与工艺开发对照，用来对比Fmoc路线和MPEG封端路线合成连接子的杂质谱、收率、工艺难度，适合CDMO平台搭建两条平行合成路线。该产品本身不带自消除PAB结构，不能直接用于ADC偶联，属于上游基础砌块，面向多肽合成实验室、固相合成平台，是Val-Cit全系列衍生物的源头原料。

使用指南与操作规范

储存条件：-20℃密封避光干燥保存，Fmoc基团对强光、强碱敏感，长期光照会降解，避免紫外直射。溶剂体系：固相合成优先DMF、NMP；液相缩合优先无水DMF/DMSO；不建议长时间水溶液放置，羧基肽易水解。固相偶联操作：常用缩合试剂HBTU/HOBt、HATU/DIPEA，投料当量2–3eq，室温偶联，茚三酮检测判断偶联终点；Fmoc脱保护使用20%哌啶DMF溶液，5–15 min，DMF充分洗涤树脂，301 nm紫外检测洗涤液可以判断脱保护是否完全。液相缩合路线：C端羧基活化，HATU/DIPEA体系，和PAB-OH氨基缩合，LC-MS跟踪产物。纯化：液相产物用制备HPLC；固相产物在合成完成后，使用TFA裂解液切割树脂，同步脱除Boc等酸敏感保护基（Fmoc耐酸，TFA条件下稳定）。安全操作：哌啶刺激性*强，全程通风橱，佩戴防毒防护；Fmoc多肽粉末避免吸入。质控要点：入库检测HPLC纯度、LC-MS分子量；固相工艺建议每批次先做小试偶联，确认茚三酮阴性、脱保护正常。关键提醒：Fmoc只被碱脱除，TFA酸性裂解条件不会脱掉Fmoc；如果后续要在N端继续接氨基酸、Boc-Glu，保留Fmoc；如果需要暴露N端氨基用于偶联抗体、配体，再用哌啶脱Fmoc；该砌块只有羧基反应位点，必须活化羧基之后才能和氨基类砌块缩合。