产品说明

Fmoc-Val-Ala-PAB-PNP是一款带Fmoc氨基保护基的完整Val-Ala-PAB-PNP ADC接头中间体，是从Fmoc-Val-Ala-OH到终功能接头之间的关键一环。分子N端Fmoc保护，依次串联Val-Ala酶切二肽、PAB自消除苄基单元，末端为PNP对硝基苯碳酸酯活性基团。PNP端可以直接和带伯氨基的细胞毒素偶联；Fmoc在碱性条件下脱除之后，暴露出N端氨基，用来接马来酰亚胺、叠氮、DBCO等各类反应锚定基团，灵活适配巯基偶联、点击化学偶联等多种ADC技术路线。Val-Ala序列自带良好血清稳定性，降低毒素提前释放风险；PAB负责酶切之后自消除释放载荷；PNP属于温和高效的氨基偶联活性基团。该中间体把二肽、自消除臂、活性偶联端预先组装完毕，研究者只需要两步核心反应：接毒素、脱保护再接反应头，大幅缩短ADC接头合成路线，减少多步纯化带来的物料损耗，是Val-Ala系列接头工业化合成与实验室批量制备的优选中间体。

基本信息
中文名称：芴甲氧羰基-缬氨酸-丙氨酸-对氨基苄基-对硝基苯碳酸酯
英文名称：Fmoc-Val-Ala-PAB-PNP
CAS号：2415633-27-5
类别：ADC可裂解连接子中间体，Fmoc保护型活性接头
外观：白色至类白色固体粉末
纯度：≥95%
溶解性：易溶于DMSO、DMF、二氯甲烷；水溶性差

反应位点：PNP碳酸酯（氨基偶联）；Fmoc保护氨基（脱保护后修饰） 酶切与释放：Val-Ala被组织蛋白酶B切割，PAB自消除释放载荷 
储存条件：-20℃避光干燥密封保存
保质期：6个月

结构与作用原理
分子分为四个功能区段：N端Fmoc氨基保护基、Val-Ala二肽酶切序列、PAB对氨基苄基自消除单元、末端PNP对硝基苯碳酸酯活性基团。Fmoc作为暂时性保护基团，隔绝N端氨基，防止氨基在PNP接毒素的步骤中发生自反应，保证反应选择性；等到毒素偶联完成，再用哌啶脱除Fmoc，释放游离氨基，引入马来酰亚胺、PEG-叠氮、DBCO-NHS等锚定基团。Val-Ala二肽维持高血清稳定性，减少循环中非特异性降解；进入溶酶体后蛋白酶识别并切断肽键，启动PAB的1,6-消除反应，断开与载荷之间的连接，释放活性小分子。PNP碳酸酯活性适中，反应选择性好，副产物对硝基苯酚很性强，很容易通过反相色谱除去，相比NHS酯，在无水有机体系下储存稳定性更高，水解速率更慢。整个分子已经完成二肽、自消除臂、活性端的拼接，跳过了C端羧基活化、缩合PAB、再活化制备PNP等多步液相合成，降低操作难度，减少杂质引入。

使用说明
母液配制：无水DMSO或者DMF溶解，配成5–10 mM母液，避光，现配现用，含水环境PNP会逐步水解失活。
载荷偶联：Fmoc-Val-Ala-PAB-PNP与氨基毒素按照1.1~1.5:1投料，DIPEA调pH7.5–8.5，室温避光搅拌2–4 h，HPLC监测反应，纯化得到Fmoc-Val-Ala-PAB-毒素中间体。
Fmoc脱保护：使用20%哌啶/DMF溶液室温处理5–10 min脱除Fmoc，脱保护完成之后快速除去哌啶，纯化得到游离氨基的Val-Ala-PAB-毒素，立刻进行下一步头部修饰。
头部修饰：游离氨基和MC-NHS、Azido-PEG-NHS、DBCO-NHS等活化酯酰化，引入目标反应基团，得到终可用于抗体偶联的linker-payload。
质控：HPLC监测PNP水解杂质、Fmoc残留、脱保护是否完全；质谱确认每一步中间体分子量。

储存与安全注意事项
避光防潮，严禁室温长期存放；哌啶脱保护步骤要快速操作，避免长时间碱性条件造成PNP水解。操作在通风橱内，做好防护。仅用于体外合成研究，偶联毒素之后产物具备细胞毒性，后续操作升级防护等级。废液按有机危废处置。

应用场景与优势
作为Val-Ala稳定型ADC接头的标准化中间体，简化整条linker-payload合成流程，减少液相合成步骤，提升批次重复性。N端可灵活改造，兼容随机巯基偶联、定点点击偶联多条技术路线，载荷更换方便，适合高通量筛选不同毒素搭配Val-Ala接头的药效与毒性。同时用于制备组织蛋白酶B响应的荧光探针，在多肽药物偶联、靶向递送材料研发中使用广。