产品说明

DBCO-(PEG)3-VC-PAB-MMAE是一款集成点击反应基团、亲水间隔链、可裂解二肽、自消除单元与MMAE载荷的一体化ADC连接子-载荷复合物，是定点偶联ADC开发中应用十分广的成品linker-payload。分子以DBCO二苯并环辛炔作为正交反应头部，搭配PEG3亲水柔性链，中间延续成熟的Val-Cit-PAB释放模块，末端偶联强效微管抑制剂MMAE。该体系依托无铜SPAAC点击化学反应，不需要铜离子催化，反应条件温和，不会造成抗体蛋白氧化损伤，完美适配经过叠氮修饰改造的抗体、重组蛋白、多肽以及各类纳米载体。在血液循环阶段，Val-Cit二肽对血清蛋白酶稳定，不会提前释放毒素；只有当ADC经由抗原识别内吞进入靶细胞溶酶体后，组织蛋白酶B特异性切割二肽序列，PAB单元发生自消除，释放具备完整活性的游离MMAE，依靠旁观者效应杀伤异质性肿瘤细胞。相较于马来酰亚胺随机偶联接头，DBCO点击接头位点可控，DAR均一性更好，副反应更少，是位点特异性ADC、蛋白药物偶联、靶向递送探针研发的核心试剂。
基本信息
中文名称：二苯并环辛炔-三聚乙二醇-缬氨酸瓜氨酸-对氨基苄基-单甲基奥瑞他汀 E
英文名称：DBCO-(PEG)3-VC-PAB-MMAE
CAS号：2353409-64-8
类别：点击化学型ADC linker-payload，溶酶体可裂解偶联物
外观：白色至浅米色固体粉末
纯度：≥95%，HPLC检测，定制级别可达98%
溶解性：易溶于无水DMSO、DMF；在纯水与中性缓冲液中溶解度偏低，PEG3链段有效改善分子亲水性，降低偶联产物聚集倾向 反应特征：DBCO环炔基团与叠氮基团发生SPAAC环加成，无铜催化；Val-Cit为组织蛋白酶B敏感位点 释放机制：蛋白酶酶切+PAB 1,6-自消除，释放游离MMAE
储存条件：-20℃，避光、密封干燥保存，建议分装单次用量
保质期：妥善储存6个月
结构与作用原理
整支分子划分为四个功能区段：DBCO无铜点击反应端、三聚乙二醇亲水间隔链、Val-Cit酶切二肽搭配PAB自消除臂、MMAE毒性载荷。DBCO二苯并环辛炔环炔结构，是SPAAC反应的经典基团，和叠氮修饰蛋白发生正交反应，反应选择性高，不和蛋白上氨基、巯基等天然官能团发生交叉副反应，支撑位点特异性偶联。PEG3柔性链起到空间隔离作用，拉开DBCO反应位点和多肽酶切骨架之间距离，弱化抗体大分子带来的空间位阻，方便溶酶体内蛋白酶结合底物序列，同时缓解MMAE疏水特性带来的聚集问题。Val-Cit是经过大量体内外验证的溶酶体敏感序列，血浆环境中稳定性强，很大程度降低胞外毒素提前泄露引发的全身毒副作用；进入溶酶体后，组织蛋白酶B水解瓜氨酸与PAB之间的酰胺键，触发PAB自发消除，断开氨基甲酸酯键，无痕释放MMAE。MMAE属于奥瑞他汀类衍生物，能够可逆结合微管蛋白，抑制微管组装，阻滞细胞周期于G2/M期，诱导肿瘤细胞凋亡，脂溶性特征使其具备旁观者杀伤效果，对抗原表达不均一的实体瘤模型具备优势。整套分子所有模块预先组装完成，拿到试剂后仅需和叠氮修饰抗体进行点击反应即可组装ADC，省去多步合成纯化工作。
使用说明
母液配制：选用无水DMSO配制母液，推荐浓度5–10 mM，全程避光操作；含水体系长时间放置会缓慢降解，母液现配现用，尽量规避反复冻融。
抗体前期修饰：预先对抗体进行定点改造，引入叠氮基团，叠氮修饰完成后脱盐纯化，除去小分子杂质，缓冲体系更换为pH7.2–7.4 PBS。
点击偶联反应：将DBCO-(PEG)3-VC-PAB-MMAE按照1.2–2.0倍当量加入叠氮修饰抗体体系，室温避光反应6–12 h；反应不需要铜离子、催化剂，操作简单。
纯化与质控：反应结束采用超滤管或者尺寸排阻色谱去除未反应的linker-payload；使用质谱、SEC-HPLC、HPLC分别测定DAR值、聚集体水平、游离毒素残留。
活性验证：设置抗原阳性、阴性细胞对照组，开展细胞增殖抑制实验；使用重组组织蛋白酶B体外孵育，HPLC追踪MMAE释放曲线，验证释放通路正常。
储存与安全注意事项
本品含有高细胞毒性MMAE组分，所有操作必须在通风橱内进行，佩戴护目镜、丁腈手套；接触过试剂的枪头、离心管单独收集，作为毒性危险废物处置。固体粉末防潮避光，回温至室温之后再开盖，防止水汽侵入。仅限体外科研合成使用，不可直接用于动物给药与人体临床。
应用场景与优势
主打位点特异性ADC研发，适合需要精准控制偶联位点、获得均一DAR的项目，常用来和传统MC马来酰亚胺随机偶联体系做对照研究。无铜点击反应避免铜离子造成的蛋白氧化、聚集，对于容易氧化的抗体、特殊重组蛋白友好；PEG3链兼顾亲水性与分子尺寸，平衡溶解性与偶联效率。同时可用于多肽偶联药物、叠氮修饰纳米载体的靶向载荷连接、荧光-毒素双标记探针构建，是新一代定点偶联技术路线的主流载荷成品。