产品说明

CY5.5-PEG-DMG，CY5.5-聚乙二醇-二肉豆蔻酰-sn-甘油，是花青素CY5.5标记的两亲性PEG脂质荧光探针，分子由DMG脂质锚、PEG亲水链、CY5.5荧光基团三部分构成。DMG为二肉豆蔻酰-sn-甘油，两条C14饱和脂肪链提供强亲脂性，可稳定嵌入脂质双分子层，直接锚定在LNP、脂质体、囊泡膜结构上；PEG链段提升水溶性，提供空间稳定作用，降低纳米颗粒非特异性蛋白吸附，同时隔离荧光染料，减少染料聚集淬灭；CY5.5属于五甲川花青素类近红外染料，激发波长约675 nm，发射波长约694 nm，处于红光到近红外过渡区间，相比CY5波长更长，组织穿透性更好，自发荧光干扰更低，荧光信号稳定，适合体外高分辨成像以及小动物活体成像研究。

本品为蓝紫色固体粉末，可溶于氯仿、二氯甲烷、无水甲醇等有机溶剂，可与各类脂质互溶，共组装形成荧光标记纳米载体；具备良好生物相容性，DMG酯键可被体内脂酶降解，PEG链经肾脏代谢排出，染料骨架荧光稳定性强。该探针优势是标记简便，不需要额外化学偶联反应，直接作为脂质组分共混进LNP配方，一步标记，不会破坏LNP包载核酸的能力、粒径、电位等关键理化参数。和CY7-PEG-DMG相比，CY5.5荧光波长更短，适配常规共聚焦显微镜的红光通道，设备兼容性更强，细胞成像分辨率更高，同时也满足小动物活体浅层组织成像需求，是细胞水平转运研究、LNP体外筛选、浅层活体成像的优选标记脂质，广用于siRNA、mRNA递送体系评价、细胞示踪、脂质载体生物分布研究，仅限科研使用。

产品应用
CY5.5-PEG-DMG首要应用于脂质纳米粒、脂质体的荧光标记，用于体外细胞水平LNP摄取与胞内转运研究。在LNP配方中微量添加本品，制备CY5.5标记的荧光LNP，和肿瘤细胞、肝细胞等细胞共孵育，使用共聚焦显微镜观察纳米颗粒附着细胞膜、内吞进入胞内、在内体分布、逐步释放核酸的动态过程，定量统计不同配方载体的细胞摄取效率，对比不同修饰策略、不同脂质配比带来的递送差异，是LNP体外高通量筛选非常常用的工具。
其次用于小动物浅层活体成像与生物分布评估。CY5.5发射波长避开大部分组织自发荧光，适合皮下肿瘤、淋巴结、腹腔部位的活体成像，静脉给药后，追踪荧光信号在小鼠体内随时间变化的富集与代谢，评估LNP在肿瘤、肝脏、脾脏的富集趋势，对比不同载体的靶向效果、循环时长；也可用于离体器官成像，给药后解剖取脏器，进行荧光成像，定量统计各器官荧光强度，完成载体生物分布半定量分析。
该探针还用于外泌体、仿生囊泡的膜标记示踪。依靠DMG脂质锚插入外泌体膜，实现外泌体荧光标记，追踪外泌体在细胞之间的传递、迁移；也用于脂质药物缓释微球标记，可视化观察微球在体内降解、药物释放过程。在制剂稳定性评价方向，通过荧光信号的均一性变化，监测LNP在血清、储存过程中是否发生聚集、颗粒解离，辅助优化制剂储存条件。同时，CY5.5标记的LNP可用于双标成像实验，搭配CY7标记的另一组分，实现双通道荧光共定位分析。

使用方法
储存和溶解
CY5.5染料避光敏感，产品-20℃避光密封保存，防潮，分装小份，减少反复冻融。母液使用无水氯仿或者DCM配制，配制全程避光，母液避光低温保存；避免长时间水溶液放置，防止酯键水解、荧光淬灭。
LNP标记制备流程
CY5.5-PEG-DMG在脂质相中微量添加，摩尔添加比例一般0.1%~0.5%，比例过高会发生荧光淬灭，同时改变LNP性质；和可电离脂质、DSPC、胆固醇、基础DMG-PEG充分共溶于有机相，混匀后采用微流控设备和核酸水相混合制备荧光标记LNP；制备全部避光操作，完成后超滤或者透析除去有机溶剂与游离小分子，收集纯化后的LNP。
成像检测操作
细胞摄取实验：荧光LNP按照梯度浓度和细胞孵育，孵育结束PBS清洗，活细胞成像或者固定后共聚焦采集CY5.5通道信号；活体成像：小鼠给药后，在预设时间点麻醉，放置活体成像系统采集信号，设置空白组扣除背景荧光；离体器官成像，解剖后取出脏器，快速采集荧光信号。

注意事项
全程避光操作，光照会造成CY5.5荧光快速衰减；脂质相需要充分混匀，保证染料均匀分散；实验设置未标记空白LNP对照组，排除脂质自身背景荧光；标记LNP建议现配现用，避光4℃短期保存；不要和强氧化性试剂混合；可搭配其他荧光探针做多通道成像，注意光谱串色校正。