产品说明

CY5-PEG-DMG，CY5-聚乙二醇-二肉豆蔻酰-sn-甘油，是CY5花青素荧光标记的PEG脂质探针，分子结构由DMG疏水脂质锚、中间PEG亲水链、CY5荧光基团三部分组成。DMG（二肉豆蔻酰-sn-甘油）带有两条C14饱和肉豆蔻酰链，脂溶性优良，能够稳定嵌入脂质双分子层，作为锚定结构，将CY5染料固定在脂质载体表面；PEG亲水链改善分子水溶性，形成空间保护层，降低纳米颗粒和蛋白之间非特异性结合，延长体内循环时间，同时隔开荧光染料分子，降低染料聚集淬灭；CY5属于五甲川花青素染料，激发波长约646 nm，发射波长约662 nm，红光波段，荧光亮度高，是共聚焦显微镜很通用的荧光通道之一，设备兼容性很强，荧光信号响应稳定，适合体外细胞成像、流式细胞检测等场景。

本品外观为深蓝色固体粉末，易溶于氯仿、二氯甲烷、无水乙醇等有机溶剂，可以和各类脂质辅料互溶，在水相中随脂质自组装形成荧光标记纳米颗粒；生物相容性好，DMG甘油酯键可被脂酶降解，PEG链经肾脏代谢。CY5-PEG-DMG属于一步标记型脂质，无需额外化学偶联，直接混入LNP脂质配方即可完成标记，不会显著改变LNP的粒径、电位、核酸包载效率与转染能力。对比CY5.5、CY7，CY5波长更短，组织穿透能力偏弱，更偏向体外细胞实验、流式检测、固定样本成像，成本友好，荧光通道成熟稳定，是LNP体外筛选、细胞摄取定量、脂质体示踪很常用的荧光脂质标记试剂，广用于mRNA、siRNA递送、细胞示踪、脂质载体体外评价科研实验，仅用于科研。

产品应用
CY5-PEG-DMG很主要的用途是脂质纳米粒、脂质体的荧光标记，用于体外细胞摄取检测与胞内转运观察。微量添加到LNP脂质配方，制备CY5荧光标记LNP，和细胞共孵育之后，借助共聚焦显微镜观察纳米颗粒结合细胞膜、内吞入胞、胞内分布的过程；同时适配流式细胞仪，对细胞群体的荧光强度进行定量检测，批量统计细胞对LNP的摄取水平，适合高通量筛选不同脂质配方、不同配体修饰载体的递送效果，是LNP早期体外筛选的核心工具。
其次用于固定样本、组织切片的荧光示踪。标记后的LNP给药之后，取组织固定、切片，进行免疫荧光共定位染色，CY5荧光信号可以和DAPI、绿色荧光蛋白GFP等其他荧光标记搭配，做多色共定位，分析LNP在组织细胞中的分布，判断载体是否进入目标细胞，和细胞器的共定位关系。
该探针还用于脂质体、仿生囊泡、外泌体的膜标记实验，依靠DMG锚定在膜表面，追踪囊泡和细胞之间的相互作用；也用于制剂稳定性体外考察，将标记LNP孵育在血清环境中，监测荧光信号分散状态，判断颗粒是否聚集。在体外转染机理研究中，CY5标记LNP可以和标记核酸的荧光信号双通道成像，区分载体本身和核酸 cargo，研究载体解离、核酸释放的过程。由于CY5可见光背景荧光偏高，该试剂较少用于深部活体成像，优先推荐细胞水平、体外机制研究使用。

使用方法
储存与溶解
CY5染料对光照敏感，产品-20℃避光密封保存，干燥防潮，分装储存，减少反复冻融。母液采用无水氯仿或者DCM配制，全程避光操作，母液避光低温保存；水溶液体系不要长时间存放，防止酯键水解、荧光淬灭。
LNP荧光标记制备
CY5-PEG-DMG在脂质相中微量添加，常规摩尔添加比例0.1%~0.5%，添加量过高容易荧光淬灭，同时影响LNP理化性质；和可电离脂质、DSPC、胆固醇、基础DMG-PEG充分共溶于有机相，混匀后使用微流控混合设备，和核酸水相混合制备荧光标记LNP；制备全程避光，完成后超滤或者透析纯化，除去有机溶剂、游离小分子杂质。
细胞成像与流式检测操作
细胞摄取成像：荧光LNP和细胞孵育预设时长，PBS清洗细胞，活细胞成像或者多聚甲醛固定后，使用共聚焦显微镜采集CY5通道荧光信号；流式检测：收集孵育后的细胞，PBS重悬，上机检测CY5荧光强度，统计阳性细胞比例与平均荧光强度，定量细胞摄取水平。组织切片实验，样本固定包埋切片后，避光染色封片，采集荧光图像。

注意事项
全程避光操作，光照会造成CY5荧光衰减；脂质相充分混匀，保证染料均匀分散；设置未标记空白LNP对照组扣除背景；CY5波段组织自发荧光较高，不适合深部活体成像；标记LNP现制现用，避光4℃短期存放；做多色成像时提前评估光谱串色，做好通道补偿；避免样品接触强氧化剂。