产品说明

SPDP-PEG-DMG，SPDP-聚乙二醇-二肉豆蔻酰-sn-甘油，是一款异双功能可还原裂解型PEG脂质交联试剂，一端是DMG疏水脂质锚，中间PEG亲水间隔链，另一端是SPDP（3-(2-吡啶二硫代)丙酸）吡啶二硫活性基团，是脂质载体表面定点偶联巯基蛋白、多肽、抗体的核心交联原料。DMG的两条C14肉豆蔻酰饱和脂肪酸链，脂溶性稳定，可以嵌入脂质体、LNP脂双层，固定整个交联分子在纳米颗粒表面；PEG链提供亲水间隔，降低空间位阻，避免活性基团紧贴脂膜而反应失效；SPDP的吡啶二硫基团是巯基特异性反应位点，可以和蛋白、多肽上半胱氨酸游离巯基发生巯基交换反应，生成二硫键连接产物，该二硫键具备还原响应特性，遇到胞内高浓度GSH谷胱甘肽、DTT、TCEP可以断裂，实现连接分子的胞内可控释放。
该试剂特点是可还原断裂，区别于马来酰亚胺这类稳定不可逆交联剂，适合需要胞内刺激响应释放的递送体系。PEG分子量常见2000、3400、5000，成品为白色粉末，溶于氯仿、甲醇、无水DMSO；SPDP活性基团遇水、遇游离巯基很易失活，对水分非常敏感。本产品仅用于科研偶联反应，不直接作为药物，禁止人体使用。
产品应用
SPDP-PEG-DMG的核心定位是可还原响应型脂质载体表面巯基偶联交联剂。
第一，LNP、脂质体表面修饰巯基化抗原、多肽、抗体，通过二硫键连接，进入细胞之后，胞内高GSH还原微环境切断二硫键，释放蛋白/多肽，实现刺激响应递送，用于疫苗、靶向蛋白递送研究。
第二，制备还原响应型靶向脂质纳米载体，将巯基修饰的靶向肽、靶向蛋白偶联在颗粒表面，实现细胞靶向，胞内触发解离。
第三，蛋白-脂质偶联物合成，用来制备DMG-PEG-蛋白类共轭物（类似前面OVA/HSA/BSA系列），作为合成中间原料，定点偶联带巯基的蛋白。
第四，可降解型探针标记，偶联巯基荧光分子，构建胞内还原敏感荧光报告纳米颗粒，用于细胞氧化还原环境成像。
第五，抗体脂质体、免疫脂质体制备，定点偶联巯基化Fab片段，降低抗体空间位阻，提升靶向效果，同时实现胞内可控释放。
第六，二硫键响应药物递送体系的机制研究，对比不可逆交联脂质试剂，考察响应释放对药效、免疫激活的影响。
使用方法
SPDP活性基团对水、巯基杂质高度敏感，全程无水无巯基环境操作。样品从-20℃取出，充分回温至室温再开盖，氮气保护更良好。使用无水DMSO或者氯仿甲醇混合溶剂配制储备液，现配现用很良好，不建议长期存放储备液。
使用路线分两种。路线一：先组装脂质纳米粒，后修饰活化基团。将SPDP-PEG-DMG和其他脂质共溶，微流控组装LNP；或者制备空白脂质体之后，加入SPDP-PEG-DMG孵育插入脂膜，得到表面带有SPDP活性位点的脂质颗粒，超滤除去未插入的游离试剂，置换到无巯基中性缓冲液（pH7.0–7.5）。再加入巯基化蛋白/多肽，室温避光孵育，吡啶-2-硫酮释放，可在343 nm检测吸光度监测偶联效率；孵育完成超滤除去未反应蛋白与副产物。
路线二：先偶联蛋白，再组装脂质颗粒。SPDP-PEG-DMG有机溶液和巯基蛋白在水有机混合体系反应，得到DMG-PEG-蛋白共轭物，纯化之后再和其他脂质共组装成LNP。反应全程不能含有DTT、TCEP等还原剂，还原剂会提前切断SPDP二硫键导致失活。偶联结束之后，如需终止反应，可加入低浓度半胱氨酸封闭剩余活性位点。产物避光保存，尽快开展后续实验。
注意事项
SPDP-PEG-DMG是高活性交联试剂，储存条件严格：-20℃，密封、避光、干燥、隔绝水汽，很好充氮气保存。SPDP吡啶二硫基团遇水缓慢水解，遇游离巯基立刻失活，所有缓冲液、溶剂必须保证无巯基杂质，不能使用含有DTT、β-巯基乙醇的缓冲体系。
取用前必须回温，水汽是该试剂失效很主要原因；开盖后尽快称量，尽量一次性用完，剩余样品惰性气体封存。反应pH窗口很窄，很优pH7.0–7.5，pH过低反应很慢，pH过高SPDP快速水解失活。反应避光，光照会加速二硫键氧化分解。
该试剂偶联产物的二硫键对还原剂敏感，后续纯化、储存体系严禁引入还原剂；如果后续实验需要裂解释放，再可控加入GSH、TCEP。投料摩尔比需要优化，SPDP位点过量会造成蛋白多聚、交联聚集。所有操作尽量冰上避光进行。试剂有刺激性，避免直接接触皮肤黏膜，佩戴护目镜手套操作。产物不可长期存放，偶联完成的脂质载体建议3天内使用。本试剂仅科研合成使用，不可直接给药。废弃物按照活性生化交联剂处理。