产品说明

ICG-淀粉样蛋白是吲哚菁绿（ICG）近红外荧光标记的淀粉样蛋白探针，属于近红外荧光生物标记试剂，主要用于淀粉样聚集物的体外检测、组织切片染色、活体近红外成像，是阿尔茨海默病、淀粉样变性相关研究的特色材料。ICG是经典近红外荧光染料，激发波长约780 nm，发射波长800–840 nm，处于近红外窗口，生物组织自发荧光干扰弱、组织穿透深度优于可见光荧光染料；淀粉样蛋白部分包含Aβ、tau等淀粉样多肽单体或者预制纤维，能够自发组装形成β折叠富集的淀粉样聚集体，是阿尔茨海默病老年斑、脑淀粉样血管病的核心病理标志物。该产品将ICG荧光基团共价偶联到淀粉样蛋白多肽链上，兼具淀粉样聚集自组装能力与近红外荧光示踪信号，既可以用来体外研究淀粉样纤维化、聚集动力学，也可以作为示踪底物，追踪淀粉样聚集体在细胞、动物体内的转运、沉积、清除过程。

该产品和游离ICG、硫磺素T等传统淀粉样染料有明显区别。硫磺素T只能结合已经形成的成熟纤维，水溶性差、只适合体外微孔板检测；游离ICG本身荧光量子产率低，容易在体内非特异性结合血浆蛋白；而ICG-淀粉样蛋白是标记好的淀粉样底物，自带聚集能力，可以直接参与纤维化组装，荧光信号随聚集状态改变，能够动态监测纤维化进程。

主要应用方向：
第一，体外淀粉样聚集动力学实验，在微孔板体系实时监测Aβ、tau蛋白纤维化，评估小分子抑制剂、多肽抑制剂对淀粉样聚集的抑制效果；
第二，脑组织切片、细胞样本的荧光染色，标记淀粉样斑块，搭配共聚焦显微镜观察斑块形态、分布；
第三，转基因AD小鼠活体近红外成像，示踪淀粉样斑块在脑部的沉积、清除，用于抗淀粉样药物的药效评价；
第四，淀粉样聚集体细胞毒性、胞内转运、小胶质细胞吞噬机制研究，追踪淀粉样纤维进入细胞之后的代谢过程。

使用上分为体外纤维化实验、组织染色、活体成像三类操作。体外聚集实验一般将ICG-淀粉样蛋白用无内毒素PBS配制成合适浓度，恒温孵育，使用近红外荧光酶标仪定时读取荧光信号，绘制聚集曲线，设置未标记淀粉样蛋白、游离ICG双对照组，区分聚集特异性荧光与染料非特异性吸附。组织切片染色时，按照免疫荧光流程孵育，避光操作，孵育完成充分漂洗，降低背景荧光。活体成像时，一般经尾静脉或者脑内注射，在对应的时间点用近红外活体成像仪采集脑部荧光信号，注意ICG本身会被肝脏代谢，需要区分肝脏本底信号与脑部斑块信号。试剂储备液优先用PBS或者DMSO避光配制，分装保存，现配现用。

储存条件为-20℃避光密封低温保存，全程避光，ICG染料见光很易光漂白失活，同时淀粉样蛋白容易自发提前聚集，不能常温久放，禁止反复冻融。操作全程避光，缓冲液推荐使用无内毒素、无蛋白酶的超纯水配制，微量蛋白酶会降解淀粉样多肽链，破坏聚集能力。该试剂仅限科研使用，不可用于人体临床诊断。实验中存在两个常见干扰：一是游离ICG的非特异性蛋白结合背景，二是ICG在体内快速经肝胆清除，活体成像时间窗口窄，需要提前摸索很良好成像时间点。另外ICG-淀粉样蛋白会自发组装，配液之后不要长时间放置，建议配制后立即开始实验。如果用于抑制剂筛选，建议搭配硫磺素T、AFM原子力显微镜、TEM电镜联合验证聚集形态，避免单一荧光信号带来的假阳性结果。