产品说明

Cy3.5-ZnDPA，Cyanine3.5 ZnDPA，Cy3.5-锌二吡啶甲基胺

简单描述

Cy3.5-ZnDPA是一款以Cy3.5花青素荧光团为信号报告单元、双锌二吡啶甲基胺（ZnDPA）为靶向识别基团的凋亡细胞荧光成像探针，也是生物成像领域标记磷脂酰丝氨酸PS的经典小分子探针。ZnDPA配位结构可以特异性识别凋亡、坏死细胞膜外翻暴露的阴离子磷脂酰丝氨酸，区别于正常细胞膜内侧的PS，实现对死亡细胞的选择性富集；Cy3.5橙红色荧光染料负责输出光学信号，激发发射区间处于生物自发荧光较低的光谱窗口，光稳定性优秀，适合活细胞长时间时序成像、组织切片荧光标记以及小动物活体荧光示踪。该探针不需要复杂孵育后清洗步骤，可实现免洗成像，和Annexin V检测体系形成互补方案。Annexin V依赖钙离子、容易受固定、通透操作影响，而ZnDPA类探针不依赖钙离子，在甲醛固定样本、离体组织、体内成像场景下稳定性更强，广用于细胞凋亡评估、抗肿瘤药物药效评价、炎症病灶、细菌感染位点示踪等方向的科研工作，是细胞死亡成像工具箱里重要的荧光试剂。

基本信息

中文名称：Cy3.5-锌二吡啶甲基胺

英文名称：Cyanine3.5 ZnDPA，Cy3.5-ZnDPA，ZnDPA-Cy3.5

分子式：c 

分子量：1450.65 

光谱参数：大吸收λabs=591 nm，大发射λem=604 nm

纯度：≥95%，HPLC检测

外观：深紫色至暗红色固体粉末 

溶解性：易溶于无水DMSO、DMF；在中性PBS缓冲液中溶解度有限，水相工作液需要加入少量助溶剂

识别靶点：凋亡/坏死细胞膜表面外翻磷脂酰丝氨酸（PS）

识别机制：Zn²⁺-DPA配位复合物与磷酸根阴离子特异性结合 

储存条件：-20℃，避光密封干燥保存，建议分装单次用量

保质期：妥善储存6个月

类别：荧光成像探针、凋亡细胞标记探针、阴离子磷脂靶向探针

结构与作用原理

Cy3.5-ZnDPA分子分为两大功能模块：Cy3.5花青素荧光信号模块、双ZnDPA靶向识别模块。ZnDPA是二吡啶甲基胺与锌离子形成的稳定配位结构，双ZnDPA构型进一步提升对磷酸基团的结合亲和力。正常活细胞中，磷脂酰丝氨酸PS分布在细胞膜内小叶，探针无法接触靶标，荧光信号弱；当细胞启动凋亡、坏死程序，细胞膜磷脂不对称性消失，PS外翻到细胞膜外侧，带有负电的磷酸头部可以和ZnDPA的锌中心发生配位结合，探针富集在死亡细胞膜表面，荧光信号显著增强。Cy3.5属于经典半花菁染料，吸收发射591/604 nm，光谱位置避开多数细胞内源性自发荧光，降低背景干扰；相比短波荧光染料，Cy3.5抗光漂白能力更强，适合长时间活细胞动态拍摄，同时和Cy5、Cy7、DAPI等染料光谱区分度良好，支持多色共染实验。该探针结合过程不依赖钙离子，这是和Annexin V大的差异优势，样本固定、通透、钙离子浓度波动都不会显著破坏探针结合能力，适配固定组织切片、长期活体成像等Annexin V难以胜任的场景。同时ZnDPA结构也可以结合细菌表面阴离子磷脂，因此也可用于细菌聚集、感染病灶的荧光标记研究。探针本身不具备细胞毒性，仅作为光学示踪工具，不干扰细胞凋亡通路本身的进程。

使用说明

1. 母液配制：使用无水DMSO配制母液，推荐储备浓度1–5 mM，全程避光操作；母液分装小管，避免反复冻融，DMSO母液避光低温保存稳定。配制工作液时，缓慢将母液滴加到PBS或者细胞培养液中，助溶剂DMSO终浓度建议控制在1%以内，防止高浓度有机溶剂造成细胞非特异性损伤。

2. 活细胞凋亡成像方案：细胞给药造模诱导凋亡之后，直接向培养体系加入Cy3.5-ZnDPA工作液，室温或者37℃孵育5–15 min；多数条件下可以直接上机成像，无需洗涤，实现免洗成像，减少凋亡细胞在洗涤过程中丢失。显微镜选用561 nm或者594 nm激光器激发，搭配Texas Red通道滤片采集信号；同步设置阴性对照组，包括未造模正常细胞、已知凋亡阳性对照。

3. 固定组织切片染色方案：甲醛固定石蜡切片或者冰冻切片，脱蜡水化之后加入探针稀释液，室温避光孵育10–20 min，PBS简单漂洗一次即可封片成像；可以搭配DAPI、Cy5标记抗体做多色共定位，区分凋亡细胞、细胞核以及靶标蛋白。

4. 小动物活体荧光成像：按照实验方案进行瘤内或者尾静脉给药，等待探针富集时间，使用小动物活体成像系统，选择对应激发发射通道采集荧光信号，追踪肿瘤区域细胞死亡、炎症、感染信号变化。

5. 质控与对照设置：光谱扫描验证吸收发射峰位置；平行对比Annexin V-FITC，对比两种凋亡标记探针的信号时序差异；设置游离ZnDPA、单纯Cy3.5染料对照，排除染料非特异性吸附带来的假阳性信号。

6. 注意事项：高浓度探针会产生非特异性膜吸附，需要提前摸索工作浓度；体系内高浓度游离磷酸根、ATP、焦磷酸根会竞争结合ZnDPA，抑制探针和PS结合，实验缓冲体系尽量避免引入高浓度含磷酸根干扰物。

储存与安全注意事项

固体粉末必须避光防潮，取出后先回温至室温再开盖，防止水汽凝结，破坏Zn-DPA配位结构，造成探针失效。操作在通风橱内进行，佩戴手套护目镜，避免粉末和浓溶液接触皮肤黏膜。本品仅用于体外细胞、离体组织以及小动物活体科研成像研究，不可用于人体诊断、临床检测。废弃探针溶液、染过的耗材按有机荧光危废规范收集处理。虽然探针本身细胞毒性很低，仍避免长时间高浓度孵育细胞，减少非特异性生物影响。

应用场景与优势

Cy3.5-ZnDPA核心用途集中在凋亡、坏死细胞荧光成像，是抗肿瘤药物筛选、细胞死亡机制研究的有力工具。相比Annexin V，不受钙离子限制、耐受固定样本、支持免洗动态成像，适合时间序列活细胞成像、组织切片回顾性染色；Cy3.5荧光亮度高、光稳定性好，光谱适配主流共聚焦显微镜和活体成像设备，多色实验兼容性强。除肿瘤药效评价之外，还可用于神经退行性疾病细胞死亡示踪、关节炎症成像、细菌感染位点标记、磷脂囊泡模型PS结合体外实验等方向。同时该探针也是ZnDPA系列探针里光谱处于Cy3与Cy5之间的补充版本，方便研究者搭建多探针组合成像方案，区分多个信号通道，是化学生物学、分子影像实验室常备的靶向荧光探针。