产品说明

Cy5-PEG-NHS ester，Cy5 聚乙二醇活性酯，是氨基靶向的近红外荧光标记 PEG 试剂，末端 NHS（N - 羟基琥珀酰亚胺）活性酯是生物标记领域很氨基反应基团，在弱碱性环境（pH 8.0–9.0）下，NHS 酯可以和蛋白、多肽、抗体上赖氨酸残基的伯氨基、多肽 N 端氨基快速反应，生成稳定酰胺键，同时释放 NHS 小分子离去基团；分子另一端为 Cy5 近红外荧光基团，PEG 间隔臂隔开染料与反应位点，兼顾水溶性、降低非特异吸附、减少染料淬灭。和直接小分子 Cy5-NHS 相比，引入 PEG 链后，标记产物水溶性显著提升，蛋白标记后不容易沉淀，在血清中的非特异性结合更低，标记后的生物大分子保留更好的生物活性；同时 PEG 链降低染料的空间位阻，NHS 基团更容易接触蛋白表面氨基，标记效率更稳定。该试剂为深蓝色固体，对湿度敏感，遇水容易水解失活，必须干燥、避光、-20℃密封保存，反应时一般先用无水 DMSO 溶解，再加入水相体系，避免提前水解。

Cy5-PEG-NHS ester 是蛋白、抗体、多肽荧光标记很通用、很成熟的近红外荧光试剂，应用覆盖免疫检测、流式、活体成像、蛋白组学多个方向。

在抗体标记实验中，它是荧光抗体制备的主要选择，将 Cy5 共价标记到一抗上，制备近红外荧光抗体，用于免疫荧光染色、流式细胞术、Western blot 近红外荧光扫膜，Cy5 低自发荧光背景可以显著提升 WB 条带信噪比，适合低丰度蛋白检测；和绿色、红色荧光抗体搭配，实现多色免疫共染。在多肽、蛋白标记中，用于标记重组蛋白、酶、细胞因子，后续追踪蛋白在细胞内转运、胞内降解、蛋白相互作用，也用于 FRET 荧光共振能量转移体系构建，研究蛋白构象变化。在固相载体修饰方面，氨基化磁珠、氨基玻片、氨基微球都可以和 Cy5-PEG-NHS 反应，构建荧光编码微球、荧光捕获芯片，用于外泌体、核酸、循环肿瘤细胞捕获检测。

在活体成像方向，标记后的荧光抗体、靶向蛋白可注射小动物体内，开展活体免疫成像，观察抗体在肿瘤、炎症部位的富集分布。在探针合成领域，科研人员利用 NHS - 氨基反应，把 Cy5 荧光引入氨基化靶向配体、纳米载体，快速合成近红外荧光探针，合成路线简单、反应成熟，重复性好。该试剂的短板在于反应不具备位点特异性：蛋白上有大量赖氨酸氨基，标记随机，标记度难以精准控制，标记过多会造成蛋白失活、荧光淬灭；NHS 酯水解速度快，水溶液中有效期短，需要现配现用，严格控制 pH 与反应时间。同时它无法区分不同氨基，不适合需要定点单一位点标记的实验，定点标记一般选择马来酰亚胺巯基反应体系。

综合对比各类 Cy5-PEG 活性试剂，Cy5-PEG-NHS ester 通用性很强、文献积累很多、操作门槛很低，是常规蛋白、抗体批量荧光标记的主力试剂，绝大多数免疫荧光、WB、流式近红外标记实验优先选用这款试剂。