产品说明

产品概述

MC-Val-Cit-PAB-PNP是VC酶切体系中成熟度很高、应用广的预活化型ADC连接子，也是MC系列payload工业化与科研筛选的核心原料。分子由马来酰亚胺己酰基（MC）、L-缬氨酸-L-瓜氨酸二肽、对氨基苄基自消除单元、末端对硝基苯基碳酸酯（PNP）活性酯依次构成。MC基团为巯基反应端，专门用于和抗体还原后暴露的半胱氨酸巯基发生迈克尔加成；Val-Cit是组织蛋白酶B特异性识别的酶切序列；PAB是经典1,6-自消除间隔基；PNP作为离去基团，用来和带有伯胺的小分子毒素缩合，生成氨基甲酸酯键。该试剂*大特点是整套骨架已经完成组装，无需用户自行做PNP活化，省去醇原料活化这一步合成操作，减少活化过程中马来酰亚胺开环、PAB提前消除等副反应，降低实验门槛。对比Boc、Fmoc保护的PNP连接子，MC端已经是成品偶联官能团，毒素偶联纯化之后得到的payload可以直接用于抗体巯基偶联，不再需要脱保护再接马来酰亚胺，合成链路更短，非常适合需要快速制备VC类ADC的研发场景，也是大量文献中MMAE、MMAF偶联的基准连接子。PNP活性酯和马来酰亚胺双键属于双敏感官能团，原料对水分、强碱、高温、光照都比较敏感，储存与操作条件相比单官能团砌块更加严苛。

作用机理与结构特点

体内释放逻辑遵循经典VC-PAB通路。当payload和抗体偶联形成ADC后，马来酰亚胺与巯基形成稳定硫醚键，在正常血液循环中，Val-Cit二肽对血浆内绝大多数蛋白酶具备良好稳定性，不会提前断裂释放毒素，保障较宽的安全窗口。ADC经抗原特异性内吞进入肿瘤细胞，转运至溶酶体后，高表达的组织蛋白酶B识别并剪切Val与Cit之间的酰胺键；肽键断裂后，暴露的PAB单元自发发生1,6-自消除反应，释放完整未修饰的活性毒素分子，发挥作用。PNP基团仅作为化学偶联的离去基团，在毒素伯胺和碳酸酯发生亲核反应后以对硝基苯酚形式脱离，不会保留在*终ADC结构内。己酰C5碳链给马来酰亚胺提供了柔性间隔，降低马来酰亚胺基团和二肽骨架之间的空间位阻，让双键更容易接触抗体内部的巯基位点，提升偶联效率与DAR可控性。该分子存在固有短板：马来酰亚胺在pH偏高、含水、加热条件下容易水解开环，永久丧失巯基反应活性；PNP碳酸酯遇水快速水解生成对应的PAB-OH醇杂质，两个降解路径会同步竞争，实验容错率偏低。

主要应用方向

首要用途是快速制备MC-VC-PAB型payload，搭配MMAE、MMAF、SN38等带有伯胺的细胞毒素，用于单抗、纳米抗体、重组融合蛋白的巯基偶联ADC制备，是CDMO平台和高校药理实验室高通量筛选候选ADC分子库的首选原料。第二作为阳性对照连接子，在亲水PEG修饰、新型酶切肽、新型自消除单元等新骨架的构效研究中做横向对比，评估新连接子在DAR分布、单体占比、聚集程度、血浆稳定性、体内药代特征上的差异。第三用于构建酶响应型荧光探针，将PNP端与氨基修饰荧光染料偶联，得到MC标记的可裂解探针，标记蛋白巯基，实现溶酶体内组织蛋白酶B活性的细胞成像与定量检测。第四用于多肽药物偶联物PDC开发，靶向肽上引入半胱氨酸巯基，通过该连接子搭载毒素，构建酶响应型肽药偶联体系。该试剂不能直接和抗体反应，必须先完成毒素偶联得到payload，再和TCEP还原后的抗体进行偶联。

详细使用指南

反应溶剂优先选用无水DMSO或无水DMF，所有溶剂提前除水，反应容器烘干冷却，严格控制体系水含量。投料摩尔比MC-Val-Cit-PAB-PNP:含伯胺毒素=1.1~1.3:1，以DIPEA为有机碱，调节体系pH稳定在7.2–8.2，室温避光搅拌2–4 h。严禁pH＞8.5，高碱会同时加速PNP水解与马来酰亚胺开环。使用HPLC持续监测反应，跟踪毒素原料峰消耗、payload产物峰生成，同步监控马来酰亚胺开环杂质。反应到达终点后，采用制备反相HPLC纯化，流动相乙腈-水+0.1%甲酸，收集主峰后快速冻干，禁止产物长时间留存于水溶液。抗体偶联阶段，用TCEP还原单抗链间二硫键，通过控制TCEP当量精准调控目标DAR；偶联缓冲推荐pH 6.0–6.5醋酸铵缓冲液，该pH下马来酰亚胺水解速率*低，巯基加成选择性*优。偶联结束后，使用SEC或者HIC色谱去除游离payload，收集单体ADC组分。全程避光操作，光照会加速马来酰亚胺降解。

储存与质控注意事项

密封分装，-20℃避光干燥保存，严格防潮，建议分装成单次实验小规格，反复冻融不超过2次；相比醇前体MC-Val-Cit-PAB-OH，本品保质期更短。质控重点指标：HPLC纯度、高分辨质谱分子量确认、PNP水解醇杂质、马来酰亚胺开环杂质、水分含量。操作佩戴丁腈手套、护目镜，副产物对硝基苯酚具有刺激性，废液单独收集，禁止直接排入下水道。偶联后的payload纯化冻干后尽快使用，不建议长期存放。