产品说明

MC-Val-Cit-PAB-OH 是经典、使用量大的 VC 系列 ADC 连接子前体，也是采用连接子的母核醇中间体，由 MC (C5)-Val-Cit 缩合 PAB 得到，一端是马来酰亚胺巯基反应基团，中间 Val-Cit 酶切二肽，末端 PAB 苄醇羟基。它是 MC 路线里承上启下的核心中间体，上游来自 MC-Val-Cit，下游活化后得到 MC-Val-Cit-PAB-PNP，直接和 MMAE、MMAF 等毒素偶联，一步得到可以直接用于抗体偶联的 payload，是绝大多数临床前 VC-MMAE ADC 的标准起始原料。对比 Boc、Fmoc 分支，MC 骨架的优势是：连接子已经预先带有抗体反应基团，毒素偶联纯化之后，产物可以直接和还原后的单抗进行巯基偶联，不再需要额外脱保护、再接 MC 的步骤，工艺链条短，是工业和科研偏好的体系。限制点同样来自马来酰亚胺：不耐强碱、高温、长时间水相，所有活化、偶联操作条件必须温和，不能接触哌啶等高浓度碱。

作用机理与结构特点

整套释放通路成熟稳定：马来酰亚胺和抗体巯基加成，形成硫醚键，循环中稳定；ADC 内吞入溶酶体，Cathepsin B 剪切 Val-Cit 肽键，PAB 发生 1,6-消除，释放完整游离毒素。MC-Val-Cit-PAB-OH 的苄醇无反应活性，必须转化为 PNP 碳酸酯活性酯才能和氨基毒素缩合。马来酰亚胺硫醚键是 ADC 领域经典偶联化学，优势是偶联效率高、DAR 可控；缺点是在高浓度白蛋白巯基环境下存在反向硫醇交换风险，这也是该类 ADC 一个已知的优化方向，但不影响它作为基准连接子的地位。该分子是所有 MC-VC-PAB payload 的共同前体，绝大多数文献报道的 VC-MMAE，都是从 MC-Val-Cit-PAB-OH 活化而来，酶切动力学、血浆稳定性、体内毒理数据积累非常丰富，是新连接子开发时的黄金对照品。

主要应用方向

第一，活化制备 MC-Val-Cit-PAB-PNP，再和 MMAE、MMAF、SN38 等含伯胺毒素偶联，得到直接可用的 payload，用于单抗、纳米抗体、融合蛋白的巯基偶联 ADC 制备，是实验室和 CDMO 主流方案。第二，作为基准对照连接子，用来评估 Gly3、Glu 修饰、新型自消除间隔基、新型酶切肽段的性能差异。第三用于构建酶响应荧光探针，PAB 端接荧光基团，MC 端标记蛋白巯基，用于细胞内溶酶体成像、Cathepsin B 活性可视化。第四用于 PDC、多肽偶联药物，标记靶向肽上的半胱氨酸巯基，搭载毒素。该产品不能直接偶联毒素，需要 PNP 活化。

详细使用指南

无水 DCM、冰浴条件进行 PNP 活化：MC-Val-Cit-PAB-OH 溶于无水 DCM，加入 PNP-Cl，缓慢滴加 DIPEA，冰浴 1 h；HPLC 监测原料醇消耗，重点监控 MC 开环杂质，一旦开环杂质升高立刻终止反应。活化产物 MC-Val-Cit-PAB-PNP 纯化冻干后，再和毒素在无水 DMSO、弱碱 DIPEA 条件下偶联，室温避光 2–3 h。全程禁止使用哌啶、浓 TFA；pH 全程控制≤8.2。得到 payload 之后，再和 TCEP 还原的抗体进行偶联，控制抗体、payload 投料比例，调控目标 DAR；偶联缓冲体系一般选用 pH 6.0–6.5 的醋酸铵缓冲，该 pH 下马来酰亚胺选择性好，水解速度低。偶联后脱除未反应游离 payload，用 SEC 或者 HIC 纯化 ADC。

储存与质控注意事项

-20℃避光干燥密封，严格控湿；主要降解杂质是 MC 开环产物。质控指标：HPLC 纯度、质谱、巯基反应活性测试、开环杂质含量。活化产物建议现制现用，不长期存放。