产品说明

Cy5-PEG-Maleimide，Cy5-聚乙二醇马来酰亚胺（Cy5-PEG-MAL），是巯基特异性定点标记近红外荧光 PEG 衍生物，马来酰亚胺（MAL）基团在中性 pH（6.5–7.5）条件下，选择性和半胱氨酸的自由巯基（-SH）发生迈克尔加成，形成稳定硫醚共价键；分子另一侧是 Cy5 近红外荧光基团，PEG 链作为柔性间隔臂，提升水溶性、降低染料聚集、减少空间位阻，同时降低标记产物和生物体系的非特异性吸附。该试剂的核心优势是反应正交性：MAL 只优先结合巯基，几乎不和氨基、羧基反应，实现定点标记，和 NHS 酯随机标记赖氨酸的模式形成鲜明对比，非常适合需要精准控制标记位点、标记化学计量比的科研场景。产品为深蓝色粉末，避光低温干燥保存，对还原剂敏感，TCEP 等强还原剂会破坏马来酰亚胺双键，反应前必须去除样本体系内过量还原剂，PEG 分子量 2000、3400、5000 很为常用。

Cy5-PEG-Maleimide 主打定点单一位点荧光标记，是蛋白工程、定点修饰、单分子成像、精准探针开发领域的核心工具。在蛋白与多肽改造中，科研人员通过基因工程在蛋白特定位点引入半胱氨酸，暴露出唯一自由巯基，再使用 Cy5-PEG-MAL 进行标记，获得位点确定、标记数目可控的荧光蛋白，这类定点标记蛋白适合单分子荧光显微镜、超高分辨成像、FRET 实验，用来观测蛋白构象动态变化、分子马达运动、蛋白复合物组装解离，是单分子生物物理研究的标配试剂；而随机 NHS 标记会产生异质性标记产物，无法满足单分子实验要求。在抗体药物偶联物（ADC）相关研究中，该试剂用来定点标记抗体巯基，评估抗体定点修饰工艺，检测抗体巯基还原程度，为 ADC 荧光示踪版本的构建提供技术参考。在纳米材料方向，巯基修饰脂质体、纳米凝胶、聚合物纳米粒可以和 Cy5-PEG-MAL 偶联，定点引入近红外荧光，追踪纳米载体在细胞、动物体内分布，适合成像引导递送研究。在生物正交多标记实验中，可以先使用 Cy5-PEG-MAL 标记巯基，再用 NHS 荧光染料标记氨基，在同一个蛋白分子上引入两种不同荧光染料，构建 FRET 对或者双色报告探针，实现双通道信号读取。在活体成像层面，定点标记后的靶向多肽、蛋白探针，生物活性保留更好，体内非特异性吸附更低，成像信噪比优于随机标记产物，用于小动物肿瘤、炎症靶向成像。

该试剂的局限集中在反应条件约束：pH 高于 8.0 时马来酰亚胺会发生水解失活，同时容易和氨基发生副反应；体系内谷胱甘肽、游离巯基小分子会竞争消耗试剂；硫醚键在强还原环境下存在逆迈克尔反应，长时间体内循环有少量脱标记风险。另外天然蛋白自由巯基数量少，多数蛋白需要基因工程引入半胱氨酸才能标记，实验门槛高于 NHS 酯标记。总体来说，Cy5-PEG-MAL 是追求标记精准度、位点可控、低异质性实验的首选巯基标记荧光 PEG 试剂，在超高分辨显微、单分子成像、定点蛋白修饰、精准诊疗探针研发中具备不可替代的价值，和 Cy5-PEG-NHS 形成互补，分别服务于定点巯基标记与随机氨基标记两大方向。