产品说明

Cy3-NHS（Cy3 琥珀酰亚胺活性酯）是Cy3 花菁母核衍生的氨基活化酯荧光染料，是生物实验室使用量很高的伯胺标记荧光试剂。NHS 活性酯官能团在弱碱性环境下，可以和生物大分子上伯氨基发生反应，生成稳定酰胺键，反应副产物 NHS 可以简单脱盐去除。该试剂很大优势是通用性强，不需要复杂的样品预处理，能够直接标记蛋白赖氨酸侧链氨基、多肽 N 端氨基、氨基修饰寡核苷酸以及氨基功能化纳米材料，是制备荧光标记抗体很主流的原料。Cy3-NHS 同样分为脂溶性与磺化水溶性版本，脂溶性版本 DMSO 溶解性好，标记效率更高；磺化Cy3-NHS 水溶性良好，可减少有机溶剂添加，适合脆弱蛋白、活细胞表面原位标记。需要重点注意：NHS 酯对水分极其敏感，受潮会快速水解，水解产物丧失偶联活性。

光谱参数：激发波长： 555 nm，发射波长： 569 nm，橙红色荧光，匹配 TRITC 成像通道，荧光量子产率稳定。

标记抗体后荧光信号强，光稳定性优于很多罗丹明衍生物。在多色荧光成像实验中，Cy3 橙红荧光和Cy5远红、Cy7 近红外光谱区分度优秀，光谱串色低，适合免疫荧光、共聚焦多通道共标实验。染料荧光在 pH7–9 区间性质稳定，适配氨基标记所需弱碱性反应条件。 

核心应用：

主打氨基随机标记，很常用于完整抗体、血清白蛋白、多肽的氨基荧光标记，制备荧光一抗、荧光二抗；免疫荧光 IF、组织免疫组化 IHC、Western blot 荧光检测；氨基修饰寡核苷酸、脂质体、微球纳米材料的表面荧光修饰；双向凝胶差异蛋白电泳、多色荧光共定位成像。该试剂是免疫实验入门首选，适合批量标记完整 IgG 抗体，用于石蜡切片、细胞爬片染色。同时可作为 FRET 供体，搭配Cy5系列染料构建能量转移探针。和Cy3-Mal 对比，Cy3-NHS 标记位点是随机分布在蛋白表面氨基，操作简单，但标记位点不可控，标记比例过高容易造成蛋白聚集，降低抗原结合活性，不适合需要单点精准标记的单分子实验。

使用方法：

推荐缓冲体系 pH8.0–8.5 碳酸氢盐缓冲液，缓冲体系内禁止含有 Tris、甘氨酸、BSA 等带伯胺组分，这类物质会竞争消耗染料，大幅降低标记效率。染料使用无水 DMSO 溶解配制母液，按照染料 / 蛋白摩尔比 4–12:1，缓慢滴加到蛋白溶液中，避光室温轻柔震荡孵育 60–90 min。孵育结束，采用脱盐柱或者透析袋纯化去除游离未反应染料。标记比例需要梯度优化，标记比率过低信号弱，标记过高会引发荧光自淬灭，同时导致抗体空间结构改变，削弱抗原识别能力。标记完成样品避光保存，避免光照造成荧光漂白。

储存：-20℃避光干燥保存，取用操作尽量快速，减少接触空气水汽，防止活性酯水解失效。

配套相关试剂：Cy5-NHS、Cy5.5-NHS、Cy7-NHS、Cy3-Mal、Cy3-amine、Cy3-COOH、碳酸氢钠缓冲盐、Sephad激发波长： G25、透析袋、BSA。