产品说明

Boc保护的 Val-Cit 二肽基础砌块，Boc 为酸性可脱除保护基，和 Fmoc 正交兼容。Val-Cit 保留组织蛋白酶 B 敏感位点，羧基端可延伸 PAB、活化基团或亲水间隔链，适合

产品概述

Boc-Val-Cit 是 VC 酶切体系基础的二肽构建单元，氨基端使用 Boc（叔丁氧羰基）酸敏保护，羧基端游离，是合成 Boc 系列 Val-Cit-PAB 全段连接子的上游起始原料。和 Fmoc 保护路线形成正交互补：Fmoc 用碱脱保护，Boc 用三氟乙酸 TFA 等弱酸脱保护，两套保护策略可以搭配，实现复杂多片段连接子的组装。分子由 L-Val、L-Cit 缩合得到，瓜氨酸侧链不带电荷，是 Cathepsin B 的经典识别底物，血浆中蛋白酶耐受度高，也是很早一批在 Brentuximab vedotin 等临床 ADC 先导研究中验证的二肽序列。该原料本身不带有 PAB 自消除单元，也没有活化位点，属于肽骨架砌块，必须继续延伸 PAB 间隔基、再做末端活化，才能进一步偶联毒素；很多 CDMO 会从 Boc-Val-Cit 出发，液相分步合成 Boc-Val-Cit-PAB-OH、Boc-Val-Cit-PAB-PNP，是 Boc 分支 VC 连接子合成路线的起点。Boc 保护基的优势是对碱稳定，在 PNP 活化、酯键缩合这类弱碱性反应条件下不会脱落，适合偏好酸脱保护工艺的合成团队；缺点是脱保护会生成异丁烯与 CO₂，高浓度 TFA 长时间处理有瓜氨酸侧链副反应风险，需要控制裂解时间。

作用机理与结构特点

Boc 基团仅作为氨基封闭保护基，不参与生物响应；真正的生物识别位点是 Val-Cit 二肽。循环系统内，Val-Cit 肽键对血浆丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶稳定；当 ADC 内吞进入溶酶体，Cathepsin B 特异性识别 P1 位瓜氨酸、P2 位缬氨酸，切断酰胺键，触发下游 PAB 单元的自消除。Boc 的正交化学特性是核心价值：在碱介导的酯化、PNP 活化、酰胺偶联反应中稳定，只有在酸性 TFA 条件下才脱除，露出游离伯胺，用于后续接马来酰亚胺、炔基等抗体反应基团。对比 Fmoc-Val-Cit，Boc-Val-Cit 更适合多步液相合成、需要多次碱处理的路线；而 Fmoc 版本更适合固相多肽合成。瓜氨酸不带羧基、氨基，侧链中性，这也是 VC 二肽相比于其他赖氨酸、谷氨酸序列稳定性更强的原因，不容易被胞外非特异性蛋白酶剪切，保障血浆稳定性。单独 Boc-Val-Cit 没有自消除单元，即便肽键被切开，也无法释放游离毒素，必须接上 PAB 或者 PABC 间隔基才具备完整释放功能。

主要应用方向

第一是 Boc 保护分支 VC 系列全套连接子的从头合成，从 Boc-Val-Cit 出发，缩合对氨基苄醇得到 Boc-Val-Cit-PAB-OH，再活化成 PNP 碳酸酯，是一条成熟、成本可控的液相合成路线。第二用于正交保护策略的复合连接子构建，同一分子同时搭配 Boc 与 Fmoc，实现多官能团分步脱保护、分步偶联，用于双毒素、双靶向的复杂偶联药物开发。第三用于酶学基础研究，单独合成 Boc-Val-Cit 荧光底物，用来定量检测 Cathepsin B 酶活、筛选组织蛋白酶抑制剂、评估不同肿瘤细胞溶酶体酶表达水平。第四用于 PDC、蛋白修饰连接子的骨架搭建，在二肽羧基端延伸各类自消除间隔基（PAB、PABC、二硫类、缩醛类），构建不同释放动力学的酶响应前药。该产品属于骨架砌块，不能直接偶联毒素，也不能直接偶联抗体，是连接子合成流程的第一步原料。

详细使用指南

溶剂体系：DCM、DMF，缩合试剂常用 HATU/HOAt、EDCI/HOBt；Boc 对碱稳定，缩合时 DIPEA 可以正常使用，不用担心提前脱保护。Boc 脱保护标准方案：20–30% TFA/DCM，室温反应 30–60 min；TFA 浓度不宜过高、时间不宜过长，长时间高浓度 TFA 会导致瓜氨酸侧链环化、肽键断裂。脱保护后 TFA 盐可以直接使用，或者用乙醚沉淀得到游离胺 TFA 盐。羧基端延伸 PAB 时，选择 HATU 作为缩合剂，投料 Boc-Val-Cit:PAB-OH=1:1.05，弱碱 DIPEA，DMF 室温反应；HATU 体系副反应更少，适合瓜氨酸底物。HPLC 纯化：乙腈-水，0.1% TFA 或者甲酸，Boc 保护肽在 TFA 流动相中稳定性尚可，但进样后尽快收集，避免在线长时间酸接触。不建议高温反应，全程 20–25℃避光。该二肽水溶性一般，高浓度下容易析出，放大反应时可以适量添加 DMSO 助溶。酶活底物合成时，可以在羧基端接 AMC、pNA 荧光报告基团，用来建立 Cathepsin B 检测平台。

储存与质控注意事项

-20℃密封干燥避光保存；Boc 基团在湿热环境下缓慢酸解，必须严格防潮。质控指标：HPLC 纯度、质谱、水分、TFA 脱保护后游离胺纯度。检测时区分 Boc 保护峰和脱保护后游离 Val-Cit 峰；长期储存定期复测 Boc 水解杂质。

液相合成路线，作为各类 VC 系列连接子起始原料。