产品说明

DBCO-DOTA-Eu是一款集无铜点击活性、稀土螯合、时间分辨荧光信号于一体的双功能大环探针，分子由二苯并环辛炔（DBCO）、DOTA四氮杂大环配体、配位饱和的Eu³⁺铕离子三部分构成。DOTA是经典1,4,7,10-四氮杂环十二烷四乙酸大环螯合剂，四个羧基与环上氮原子协同配位，和Eu³⁺形成热力学稳定的螯合物，生理pH环境下金属离子不易解离，避免游离稀土离子带来的细胞毒性与信号泄漏；DBCO属于张力环辛炔，依靠环张力实现SPAAC无铜点击反应，不需要铜离子催化，可温和特异性结合叠氮基团，完美适配活细胞、活体生物体系，规避铜离子造成的蛋白氧化、核酸断裂等问题；铕离子属于镧系发光离子，拥有超长荧光寿命、超大斯托克斯位移，有效规避生物样本自发荧光干扰，是时间分辨荧光TRF、ICP-MS元素定量的优质信号源。
产品外观多为白色或浅米色固体粉末，可溶于DMSO、DMF、甲醇、水相缓冲液；和游离铕盐相比，预先螯合完成的DBCO-DOTA-Eu无需后续螯合步骤，标记流程更简单，批次信号均一；区别于普通荧光染料标记探针，镧系铕信号抗淬灭能力强，适合高背景生物样本检测。DBCO疏水芳香环结构带来较快的叠氮反应速率，但在高浓度谷胱甘肽还原环境下稳定性有限，更适合体外标记、细胞表面糖蛋白、代谢糖工程标记、预靶向成像等科研方向。该产品HPLC纯度高，重金属残留可控，仅用于实验室科研，不直接用于人体临床给药。

产品应用
DBCO-DOTA-Eu很核心用途是代谢糖工程与细胞表面糖链标记定量。通过代谢糖代谢将叠氮修饰岩藻糖、唾液酸导入细胞膜糖蛋白、糖脂，之后加入DBCO-DOTA-Eu，依靠SPAAC点击反应定点标记叠氮基团，借助时间分辨荧光或者ICP-MS检测铕信号，实现细胞表面唾液酸、岩藻糖等糖基化修饰的精准定量，广用于肿瘤糖基化、细胞转移、药物干预糖通路机制研究，检测下限远高于常规有机荧光探针。
其次用于生物分子元素标记、ICP-MS单细胞定量分析。Eu作为特征同位素标签，DBCO-DOTA-Eu可标记叠氮修饰抗体、多肽、适配体、纳米载体，实现蛋白、细胞膜标志物的单细胞ICP质谱计数与定量，是单分子、单细胞水平蛋白绝对定量的热门工具，广应用于免疫分析、靶向探针开发。同时可构建时间分辨荧光免疫检测试剂盒，用于ELISA、均相TRF检测，降低血清样本荧光背景干扰，提升试剂盒信噪比。
另外该探针可用于活体预靶向成像研究。先注射叠氮修饰靶向载体在肿瘤富集，再注射DBCO-DOTA-Eu，通过体内点击实现二次靶向标记，降低探针非特异性富集；也可用于脂质体、纳米颗粒表面点击修饰，构建兼具荧光示踪与金属成像能力的多功能诊疗前体。

使用方法
储存与母液配制
产品-20℃避光密封干燥保存，分装小份减少反复冻融；DBCO对强还原剂敏感，避免和TCEP、高浓度GSH长期共存。母液优先用无水DMSO配制，避光保存；水溶液母液现配现用，缓冲体系优先pH 7.0–7.4 PBS，长时间水相放置会缓慢降低DBCO活性。
细胞点击标记操作
细胞经过代谢糖孵育引入叠氮基团后，PBS充分清洗去除游离叠氮糖；配制DBCO-DOTA-Eu工作液，终浓度一般在5–50 μM，37℃避光孵育30–120 min；孵育结束PBS多次清洗，去除未结合探针，即可进行时间分辨荧光检测或者细胞收集用于ICP-MS测试。孵育时间需要梯度优化，兼顾标记效率与非特异性吸附。
生物分子偶联
叠氮修饰多肽、抗体、纳米材料溶于中性缓冲液，按照DBCO-DOTA-Eu:叠氮底物摩尔比1.2:1投料，室温避光反应2–4 h；反应完成使用超滤管或者凝胶过滤色谱除去未反应探针，纯化收集标记产物。反应体系避免铜离子、高浓度巯基试剂。

安全与注意事项
全程避光操作；镧系配合物粉末避免吸入；实验设置不含叠氮的空白对照组扣除非特异性吸附；不适合长时间胞内还原环境孵育；标记产物建议4℃避光短期保存。