产品说明

描述

COOtBu-PEG-FA是叶酸靶向、叔丁酯保护羧基的双功能PEG衍生物，一端叶酸（FA）靶向识别叶酸受体；另一端羧基被叔丁酯掩蔽保护，中性、弱碱性条件稳定，TFA酸性条件脱保护释放游离羧基；PEG链作为柔性连接臂。该试剂的合成策略是先利用叶酸靶向特性完成细胞孵育、纳米载体组装、靶向富集实验，后续酸性脱叔丁酯暴露羧基，再通过EDC/NHS活化，偶联氨基类药物、荧光分子、多肽。叔丁酯保护避免叶酸端在前期操作中发生羧基自活化、自偶联，防止分子间交联。对比FA-PEG-COOH，游离羧基在存放、配方制备过程中容易缓慢活化产生杂质；叔丁酯封闭羧基之后试剂储存稳定性更好，保质期更长。PEG链降低叶酸的空间位阻，保障叶酸和叶酸受体的识别亲和力，同时改善水溶性，减少叶酸分子本身疏水聚集，是叶酸靶向体系分步修饰的保护型中间体。

基本信息

中文名称：叔丁酯聚乙二醇叶酸
英文名称：COOtBu-PEG-FA
常用PEG分子量：1000、2000、3400、5000 Da
外观：黄色固体粉末
溶解性：溶于DMSO、DMF，水溶性偏弱
基团特性：叶酸靶向叶酸受体；叔丁酯保护羧基，酸解脱保护
储存条件：-20℃密封避光干燥保存，避光，远离酸性挥发气体，防止提前脱保护

作用原理

COOtBu-PEG-FA依靠叔丁酯的掩蔽作用实现叶酸靶向体系分步构建。叶酸配体是靶向识别单元，特异性识别细胞膜表面高表达叶酸受体；叔丁酯基团屏蔽羧基活性，在脂质薄膜制备、胶束透析、细胞孵育、靶向富集等一系列实验过程中保持惰性，不会自发发生酰胺化副反应，解决游离羧基叶酸PEG容易自交联、储存变质的痛点；PEG链一方面改善叶酸水溶性，叶酸本身水溶性差，PEG修饰之后可以在水相体系稳定分散；另一方面拉开叶酸和叔丁酯两个功能端距离，避免羧基活化之后的空间位阻阻碍叶酸受体结合。当靶向组装、靶向孵育完成之后，TFA处理裂解叔丁酯，释放游离羧基，就可以使用EDC/NHS活化羧基，接入氨基修饰的功能分子。整个流程顺序可控：先靶向组装/靶向识别，后活化羧基载药、标记，适合需要先验证靶向能力、再接载功能分子的研究方案。

使用指南

实验分为靶向组装/靶向孵育模块、叔丁酯酸性脱保护模块、羧基活化偶联模块。
模块一：纳米载体靶向组装（脂质体/胶束配方）。COOtBu-PEG-FA和磷脂、PLA等成膜材料共同溶于DCM或者氯仿，旋转蒸发形成薄膜；PBS水合，薄膜分散法制备叶酸靶向脂质体；该阶段叔丁酯稳定，不会参与反应；制备完成透析除去有机溶剂。如果是细胞靶向预孵育实验，直接用DMSO配制母液，PBS稀释，加入细胞培养液孵育；设置游离叶酸竞争对照组。全程禁止接触TFA、酸性缓冲液。
模块二：叔丁酯脱保护。将组装好的纳米载体冻干，分散于无水DCM；配制25% TFA/DCM脱保护液，室温搅拌60–90 min；脱保护结束旋蒸除去TFA与溶剂，冷乙醚沉淀，真空干燥除去酸性残留；产物重新分散在pH5.2 MES缓冲液。脱保护效率用HPLC监测，对比脱保护前后保留时间。
模块三：羧基活化偶联。MES缓冲液体系，加入EDC和NHS，摩尔比PEG:EDC:NHS=1:1.5:2，室温活化40 min；活化完成调节pH至7.2–7.6，加入氨基修饰小分子、多肽、荧光染料，孵育3 h；羟胺淬灭过量活性酯，超滤透析纯化。 实验重点提示：叶酸对光敏感，全部操作避光；叶酸受体结合实验缓冲液不要使用高浓度叶酸；脱保护步骤TFA必须除干净，残留酸会快速水解NHS活性酯；叶酸母液DMSO配制，不要长期存放水溶液。

应用场景

叶酸靶向纳米载体分步载药、叶酸受体细胞靶向预标记、保护型叶酸靶向探针合成、脂质体靶向配方中间体、叶酸靶向生物芯片修饰。

常见热门问题解答

Q1：COOtBu-PEG-FA水溶液稳定性怎么样？
A1：中性水溶液短期孵育稳定，长时间放置、pH低于6会缓慢脱叔丁酯，建议现配现用。
Q2：脱保护之后叶酸结构会不会被TFA破坏？
A2：常规TFA短时间处理叶酸稳定性尚可，高浓度TFA过夜会造成叶酸降解，控制脱保护时间。
Q3：和FA-PEG-COOH对比优势？
A3：叔丁酯封闭羧基，储存稳定性更好，不容易自偶联；适合先组装靶向载体、后载药的分步路线；FA-PEG-COOH适合一步直接活化偶联。
Q4：能不能在脱保护之后继续长时间孵育细胞？
A4：脱保护之后是FA-PEG-COOH，羧基没有靶向毒性，但活化状态下容易和蛋白氨基非特异性结合，活化后尽快完成偶联。