产品说明

Azido-PEG3-Val-Cit-PAB-PNP是一款溶酶体蛋白酶可裂解型ADC点击化学连接子，也是目前点击化学路线制备抗体药物偶联物常用的活性酯类接头试剂。分子一端带有叠氮基团，可参与无铜点击反应；中间嵌入三聚乙二醇亲水链、缬氨酸-瓜氨酸二肽酶切位点与PAB自消除单元；末端为PNP对硝基苯碳酸酯活性基团，能够高效和带有氨基的细胞毒素分子完成偶联。该试剂在生理血清环境下稳定性优秀，进入靶细胞溶酶体后，组织蛋白酶B特异性切割Val-Cit二肽，随后PAB发生自消除，无痕释放载荷分子，非常适合定点偶联、非半胱氨酸改造抗体以及蛋白、多肽、纳米载体的生物偶联开发，广用于新型ADC、PROTAC、靶向递送载体的前期合成研究。
基本信息
中文名称：叠氮-三聚乙二醇-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄基-对硝基苯酚碳酸酯
英文名称：Azido-PEG3-Val-Cit-PAB-PNP
CAS号：2055047-18-0
类别：可裂解ADC连接子，点击化学生物偶联试剂
外观：白色至类白色固体粉末
纯度：常规≥95%，定制可≥98%
溶解性：易溶于DMSO、DMF、二氯甲烷；在纯水、PBS缓冲液中溶解性一般，PEG3链段相比无PEG版本水溶性明显提升 反应特征：叠氮基团可与DBCO、BCN等环炔发生SPAAC无铜点击；PNP碳酸酯对氨基具备高反应活性；Val-Cit对组织蛋白酶B敏感
储存条件：-20℃避光密封干燥保存，避免反复冻融 分子量：可定制核对
保质期：妥善储存6个月
结构与作用原理
整段分子分为四大功能模块：叠氮端点击反应锚定区、三聚乙二醇柔性亲水间隔链、Val-Cit酶敏感二肽+PAB自消除间隔臂、PNP活性碳酸酯偶联端。叠氮作为正交反应基团，和抗体/蛋白上预先引入的DBCO位点发生环加成，反应条件温和，不会破坏蛋白高级结构。PEG3链可以拉开载体与多肽酶切位点之间的空间距离，减少空间位阻，同时改善分子亲水性，降低偶联产物聚集倾向。Val-Cit是经典溶酶体酶切序列，血液循环中血清蛋白酶几乎不识别，偶联物进入细胞内吞进入溶酶体之后，高表达的组织蛋白酶B切断瓜氨酸与PAB之间的酰胺键；PAB单元发生自发1,6-消除反应，脱离载体骨架，释放游离的载荷分子，保证载荷保持原有生物活性。末端PNP碳酸酯属于高活性氨基偶联基团，相比羧酸，不需要额外缩合试剂，在弱碱环境下即可与药物上伯氨基生成稳定氨基甲酸酯键，副产物对硝基苯酚易于纯化去除。
使用说明
偶联前准备：试剂开封操作全程避光，优先使用无水DMSO或DMF配制成母液，母液现配现用，母液浓度推荐5–20 mM；含水体系会造成PNP水解失活，体系必须严格除水。
载荷偶联步骤：将该试剂与氨基修饰细胞毒素按照摩尔比1.1~1.5:1投料，加入有机碱如DIPEA调节pH至7.5–8.5，室温避光搅拌2–4 h，TLC或HPLC监测反应，反应完成后直接沉淀或制备色谱纯化，得到叠氮封端的linker-payload中间体。
点击偶联：纯化后的叠氮-linker-payload再和DBCO修饰抗体/蛋白按照投料比1.2~2 eq进行SPAAC点击反应，缓冲体系选用pH7.2–7.4 PBS，室温反应4–12 h，超滤脱盐去除小分子杂质，测定DAR。
质控方式：HPLC监测纯度，质谱确认分子量，酶切释放实验验证组织蛋白酶B响应释放能力。
注意投料过量控制：PNP基团水解速率随pH升高加快，不要在碱性条件长时间放置；点击反应尽量避免铜离子体系，防止蛋白氧化损伤。
储存与安全注意事项
固体粉末严禁接触湿气、强光。分装成单次使用小份，减少开盖次数。操作在通风橱内完成，佩戴护目镜、丁腈手套，避免皮肤黏膜接触。该物质仅用于体外科研合成，不用于人体给药。废液按照有机危废统一处理。
应用场景与优势
主要用于开发基于点击化学的定点偶联ADC、多肽药物偶联物、纳米颗粒靶向递送系统。对比传统马来酰亚胺接头，点击正交反应选择性更强，副反应更少，适配位点特异性偶联策略；PEG3结构平衡水溶性和分子尺寸，不容易造成ADC聚集；PNP活性酯一步接毒素，合成路线简洁。适合高校、CRO企业做新型连接子筛选、同靶点不同偶联技术路线对比研究。