一、基础信息卡

  • 中文名称:异硫氰酸荧光素标记脂多糖
  • 英文名称:Fluorescein Isothiocyanate-Labeled Lipopolysaccharide
  • 常用别称:FITC-LPS、FITC-脂多糖、荧光素标记LPS、FITC-Lipopolysaccharides、绿色荧光内毒素探针
  • 来源背景:脂多糖(LPS)为革兰氏阴性菌外膜组分,常见来源于大肠杆菌(如 E. coli O55:B5、O111:B4 等血清型)
  • 性状:淡黄色至黄绿色冻干粉末或冻干絮状固体;复溶后呈淡黄色至黄绿色溶液,轻微乳光或浑浊(LPS两亲性聚集)属正常现象
  • 溶解性:溶于水、PBS、生理盐水;DMSO/DMF可助溶;LPS为两亲分子,水相中易形成胶束样聚集体,轻微浑浊不影响使用
  • 荧光参数:激发 Ex ≈ 490–495 nm,发射 Em ≈ 515–520 nm,黄绿色荧光
  • 纯度:科研级 ≥95%(HPLC、荧光光谱、LAL/内毒素活性参考、COA可附)
  • 储存条件:-20℃ 避光、密封、干燥保存;避免反复冻融与强光照射
  • 保质期:原包装合规储存 12 个月
  • 运输条件:低温冰袋或干冰,避光防水,到货后及时回冻
  • 供应商:西安瑞禧生物科技有限公司
  • 应用方向:TLR4识别与内吞示踪、巨噬细胞/树突状细胞摄取、炎症模型构建、内毒素清除与载体免疫评价、药物筛选
  • 温馨提示:本产品仅供科研实验使用,不能用于人体实验、临床诊疗及食品用途。

二、材料相关介绍

1. 结构组成与标记原理

LPS 天然结构分三段:
  • 脂质A(Lipid A):疏水锚定与TLR4/MD-2激活核心;
  • 核心寡糖(Core oligosaccharide):连接区;
  • O-抗原(O-antigen):重复多糖链,决定血清型。
FITC 通过异硫氰酸酯基(–N=C=S)与LPS修饰后暴露的伯胺(或经衍生引入的氨基)形成稳定硫脲键,共价偶联后不易在生理条件下解离。标记过程以保留脂质A与多糖整体构象为目标,使产物同时具备:
  • LPS的受体结合与免疫激活能力;
  • FITC的可视化绿色荧光输出。

2. 物理化学与光学特征

  • 两亲性:水中自聚集,Zeta多为负电(糖链磷酸基贡献);
  • 荧光稳定:常规生理离子、短时间成像下信号衰减慢;
  • pH敏感:酸性内体环境中FITC亮度会下降,定量摄取时需设pH校正或选AF488/Cy3对照;
  • 不显著改变LPS分子量分布:SDS-PAGE/质谱可看标记均一性。

3. 实验价值定位

FITC-LPS(异硫氰酸荧光素标记脂多糖)技术资料:结构解析与实验应用

FITC-LPS不是“单纯染料”,而是“免疫活性+空间示踪”双功能探针:
  • 能激活TLR4/NF-κB、MAPK通路,诱导TNF-α、IL-6、NO等炎症读数;
  • 能同时回答“LPS去哪了、怎么进去的、激活了没有”。

三、实验应用与机制研究

3.1 免疫细胞结合与内吞追踪

  • 细胞模型:RAW264.7、BMDM、DC、小胶质细胞、单核细胞;
  • 方法:
    • 4℃结合组(抑制内吞)vs 37℃摄取组;
    • 共聚焦看膜结合→内吞→内体/溶酶体转运;
    • 流式定量摄取效率(MFI);
  • 共染:LysoTracker、Lamp1、EEA1 解析胞内路径。

3.2 TLR4通路与炎症机制

  • LPS结合LBP→CD14→TLR4/MD-2复合物;
  • FITC-LPS用于空间定位受体簇集;
  • 配合WB/qPCR/ELISA读NF-κB、p38、JNK、ERK及细胞因子;
  • TLR4敲低/敲除细胞作对照,区分特异性识别。

3.3 炎症模型与药物筛选

  • 体外:巨噬细胞/上皮细胞炎症模型(10 ng–1 µg/mL梯度);
  • 体内:小鼠脓毒症、内毒素血症、肺炎模型活体分布(IVIS类系统);
  • 筛选:TLR4抑制剂、抗炎小分子、内毒素吸附材料;
  • 读数:荧光分布 + 炎症因子 + 组织病理。

3.4 纳米递送与内毒素清除评价

FITC-LPS(异硫氰酸荧光素标记脂多糖)技术资料:结构解析与实验应用

  • 作为“模型内毒素”评估:
    • 纳米粒对LPS的吸附/中和;
    • 血液净化材料、多糖/壳聚糖吸附剂效率;
    • 载体本身残留内毒素示踪;
  • 可把FITC-LPS掺入LNP表面,观察免疫原性调控。

3.5 多参数与多标实验

  • 与PE/Cy5/APC通道兼容,做流式多色;
  • 与RB/Cy5-LPS双标做竞争结合;
  • 与Hoechst/DAPI、线粒体探针共染做亚细胞定位。

四、操作建议与对照设计

FITC-LPS(异硫氰酸荧光素标记脂多糖)技术资料:结构解析与实验应用

  1. 母液配制:室温回温后开盖,无内毒素水/PBS配 0.1–1 mg/mL,温和涡旋,分装避光-20℃;
  2. 工作浓度:细胞结合/激活常从 10–100 ng/mL 起步;吞噬示踪可升至 µg/mL 级;先跑剂量曲线;
  3. 避光:全程黄光操作,固定用4% PFA,DAPI衬核;
  4. 必设对照:
    • 游离FITC(背景泄漏)
    • 未标记LPS(活性对照)
    • 4℃结合对照(区分膜结合/内吞)
    • TLR4缺失/阻断肽组
  5. 定量修正:酸性区室FITC变暗,可用Alexa Fluor 488-LPS或pH校准曲线补偿。

五、相关材料与瑞禧生物配套供应

1. 其他荧光通道LPS

  • Cy3-LPS(橙红)
  • Cy5-LPS / Cy7-LPS(近红外活体成像)
  • Alexa Fluor 488-LPS(光稳定绿光)
  • RB-LPS(罗丹明B标记)
  • ICG-LPS(近红外内毒素示踪)
  • Biotin-LPS(链霉亲和素放大系统)

2. 未标记与功能化LPS

  • 天然LPS(E. coli O55:B5 / O111:B4 / O26:B6)
  • 脂质A、单磷酸脂质A(MPLA)
  • NH₂-LPS、COOH-LPS(再偶联用)
  • LPS-PEG、LPS-壳聚糖复合体

3. 免疫与炎症研究配套

  • 巨噬细胞/DC培养模型试剂
  • TLR4/MD-2重组蛋白、CD14抗体
  • 炎症读数:TNF-α、IL-6、IL-1β ELISA
  • 内吞抑制剂:氯喹、巴弗洛霉素、网格蛋白阻断剂
  • 细胞器探针:LysoTracker、MitoTracker、Hoechst

4. 纳米与吸附评价系统

  • 空白LNP、PLGA、介孔硅、纳米金
  • 内毒素吸附材料(多糖微球、活性炭修饰粒)
  • 血液净化膜片、仿生肝窦材料
  • 荧光定量支持:DLS、Zeta、共聚焦、流式、IVIS方案

5. 定制服务

  • 不同血清型LPS荧光标记
  • 多色双标LPS(FITC+Cy5)
  • 低内毒素级/高标记密度定制
  • 冻干稳定性优化与COA全项表征(荧光比、分子量分布、内毒素活性)

六、小结

FITC-LPS 把“内毒素识别”变成可看见、可定量、可机制拆分的实验变量。它在免疫学中的价值不在于替代天然LPS,而在于让LPS的膜结合、内吞、转运、TLR4激活四件事能在同一体系里被同步读取。配合瑞禧生物提供的多通道标记LPS、功能化衍生物与纳米评价配套,可系统搭建从细胞机制到体内分布的科研闭环。
温馨提示:本品为科研试剂,仅供实验室研究使用,不能用于人体实验、临床诊断或治疗。