产品说明

DSPE-PEG-Krestin，二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-克雷司汀，是多糖类配体修饰PEG磷脂衍生物，克雷司汀（Krestin，PSK）是云芝来源蛋白多糖，具备丰富糖链结构，可和细胞表面糖受体、模式识别受体相互作用，多用于免疫调节相关纳米载体、免疫靶向脂质体、免疫佐剂递送体系研发。该分子由DSPE疏水磷脂锚定段、PEG亲水连接臂、末端克雷司汀多糖蛋白复合物三部分共价偶联而成；PEG分子量主流为2000、3400、5000Da。产品外观白色至浅米色粉末，可溶于氯仿、DCM等有机溶剂，可和磷脂、胆固醇、佐剂原料共组装脂质体、胶束，HPLC纯度≥95%，多糖偶联结构稳定，属于免疫方向特色靶向/免疫调节磷脂原料。 DSPE疏水双链嵌入脂双层，稳定锚定在纳米载体表面；PEG链形成水化层，降低非特异吞噬、延长循环时间，同时拉开多糖大分子和载体表面距离，减少空间位阻，让克雷司汀糖链充分暴露，和免疫细胞表面受体接触；末端克雷司汀作为功能单元，是大分子蛋白多糖，能够和巨噬细胞、树突状细胞表面多种糖受体、PRR模式识别受体结合，调控免疫细胞活化，同时赋予纳米载体免疫细胞靶向能力。和小分子糖、短肽配体相比，克雷司汀是大分子多糖，具备多重糖识别位点，免疫调控效应更丰富，但同时对储存、制备条件更加敏感，更容易出现变性降解。
DSPE-PEG-Krestin科研应用集中在免疫递送、免疫佐剂载体方向。第一，免疫靶向脂质体制备，构建克雷司汀修饰脂质载体，包载抗原、佐剂、免疫调节小分子，靶向巨噬细胞、树突状细胞等抗原提呈细胞，提升载体在免疫细胞的富集，用于疫苗递送、免疫激活研究。第二，多糖-免疫受体相互作用研究，构建多糖修饰仿生膜界面，在细胞、SPR体系研究克雷司汀多糖和免疫细胞表面受体的结合规律，研究糖链结构对免疫激活的影响，属于多糖免疫学、天然免疫基础研究工具。第三，复合免疫纳米平台开发，搭配荧光磷脂示踪，制备免疫靶向荧光脂质体，在共聚焦、流式下观察载体被免疫细胞摄取、胞内转运过程，评估抗原提呈细胞的摄取效率。第四，免疫佐剂递送体系改性，用于亚单位疫苗、多肽疫苗脂质载体修饰，利用克雷司汀本身免疫调控活性，和载体包载佐剂形成协同免疫刺激效果，提升免疫应答水平。第五，多糖配体构效研究，对比不同多糖（克雷司汀、香菇多糖、葡聚糖）修饰磷脂的细胞结合、免疫激活差异，研究多糖分子量、糖链分支对靶向和免疫功能的影响。第六，巨噬细胞相关体外模型构建，修饰微球、芯片界面，实现巨噬细胞选择性捕获，用于炎症、免疫细胞功能体外评价模型搭建。
克雷司汀属于大分子蛋白多糖，稳定性短板突出，操作管控要求高于单糖、短肽磷脂。第一，储存条件：-20℃密封避光干燥保存，严禁反复冻融，必须小份分装单次使用；多糖蛋白复合物在冻融过程中很易发生构象改变、糖链断裂、蛋白变性，直接丢失免疫识别与免疫调节活性；同时多糖很易吸潮，全程防潮。第二，投料比例控制，克雷司汀大分子空间体积大，摩尔添加比例通常偏低，一般0.5~3mol%，比例偏高很易造成纳米颗粒团聚、粒径暴涨、PDI恶化，很难得到单分散脂质体，需要低比例梯度摸索。第三，制备温度严格控制，旋蒸、水合温度不超过50℃，高温会造成多糖降解、蛋白部分变性；禁止强酸碱、强氧化试剂接触该材料，多糖糖苷键在强酸下快速水解破坏。第四，特异性与免疫对照设置，实验设置游离克雷司汀多糖竞争对照组，验证载体摄取是多糖受体介导；同时设置空白DSPE-mPEG脂质体、无关多糖修饰磷脂对照，区分多糖特异性免疫效应和非特异刺激、静电吸附效应。第五，血清体系风险，血清中存在大量糖苷酶、蛋白酶，长时间血清孵育会逐步降解载体表面克雷司汀糖链，免疫活性随时间衰减，血清稳定性、体内预实验需要设置时间梯度检测活性留存。第六，应用边界：本品仅科研试剂，用于免疫基础研究、载体研发，不属于免疫药物、疫苗成品，不可直接用于动物治疗、人体给药；克雷司汀本身存在批次来源差异，不同批次多糖分支、分子量分布有区别，新批次到货需要先做细胞预实验验证活性。第七，过滤工艺：大分子多糖修饰脂质体黏附性强，很易堵膜，优先选用大孔径预滤之后再过0.22μm低吸附滤膜，缓慢加压；制备完成的脂质分散液4℃短期存放，禁止冻存。第八，培养基添加剂注意：培养基中游离多糖、葡萄糖、甘露糖等单糖多糖，会竞争性抑制克雷司汀和免疫细胞受体结合，细胞孵育体系尽量控制游离糖背景，避免假阴性结果。