产品说明

描述

NHS-PEG-OH是异双功能PEG衍生物，一端NHS活性酯，另一端伯羟基，中间PEG柔性连接臂。NHS活性酯在pH7.2–8.5弱碱性环境下，快速和伯氨基发生酰胺化偶联；羟基活性温和，在NHS偶联条件下保持稳定，后续可以在无水有机体系活化衍生。该试剂属于预制活化型PEG中间体，优先通过NHS端共价标记氨基底物（氨基多肽、氨基纳米颗粒、蛋白），纯化除去游离试剂之后，再对羟基端进行磺酰化、酯化改性，继续引入新的功能基团。对比羧基-PEG-OH，省去现场EDC/NHS活化步骤，批次稳定性更好；对比NHS-PEG-NHS双活性酯，单NHS版本规避了双端同时反应造成的交联、分子间聚合副反应，更容易得到单端修饰产物。NHS基团遇水很易水解失效，储存条件苛刻；羟基作为预留拓展位点，赋予分子后续改造空间，是氨基底物分步修饰体系里一款非常实用的上游骨架PEG。

基本信息

中文名称：活性酯聚乙二醇羟基
英文名称：NHS-PEG-OH
常用PEG分子量：1000、2000、3400、5000 Da
外观：白色固体粉末
溶解性：溶于DMSO、DCM；水相中NHS快速水解
基团特性：NHS活性酯和伯氨基反应；羟基低活性，需活化衍生
储存条件：-20℃密封真空干燥保存，避开水汽，开盖快速操作

作用原理

NHS-PEG-OH依靠两个端基的反应正交性实现分步修饰。NHS活性酯是高活性酰化试剂，在合适pH窗口和伯氨基生成稳定酰胺键，副产物NHS小分子易除去；pH＞8.5时水解速率急剧上升，pH＜6反应速率很低。羟基在该偶联体系中化学惰性，不会竞争NHS位点；等氨基偶联完成、产物纯化之后，转移至无水有机环境，羟基可以被TsCl、酸酐活化，转化为OTs、羧基等活性官能团。单NHS设计的核心优势就是规避双NHS试剂容易引发的交联副反应：双NHS-PEG和氨基底物反应，容易一个PEG分子同时连接两个氨基底物，造成交联团聚；NHS-PEG-OH只有一个活性酯位点，只能单端锚定氨基底物，另一端羟基保留，产物均一可控。

使用指南

实验分为NHS-氨基偶联模块、羟基活化衍生模块，严控NHS水解。
模块一：氨基底物偶联。配制pH7.4无胺PBS缓冲液；溶解氨基多肽或者氨基纳米颗粒，加入NHS-PEG-OH，NHS摩尔当量1.2倍；室温避光孵育1.5–2.5 h；羟胺淬灭剩余活性酯；超滤、透析除去游离试剂。缓冲液严禁Tris、甘氨酸等含伯氨基杂质。
模块二：羟基磺酰化衍生。将偶联产物冻干，氮气保护溶于无水DCM；加入三乙胺、对甲苯磺酰氯，室温搅拌6–8 h；沉淀纯化得到OTs-PEG-氨基底物偶联物，OTs可和亲核试剂取代。 质控要点：称量动作快速，减少空气中水汽接触；NHS母液不提前配水溶液；设置不加氨基底物空白组评估水解；TNBS检测氨基消耗判断偶联效率。

应用场景

氨基生物分子分步标记、单端修饰PEG中间体、蛋白/多肽后修饰骨架、纳米颗粒表面分步功能化、生物偶联上游原料。

常见热门问题解答

问题1：NHS水解之后产物是什么？
解答：水解产物是COOH-PEG-OH，失去快速偶联能力。

问题2：能不能先活化羟基再做NHS偶联？ 
解答：不推荐，羟基活化产物会和氨基底物发生副反应。

问题3：和NHS-PEG-NHS对比优势？ 
解答：不会发生分子间交联，产物单修饰，均一度更高。

问题4：羟胺淬灭原理是什么？ 
解答：羟胺上的氨基优先和剩余NHS活性酯反应，终止偶联，不会破坏已经形成的酰胺键。