一、基础标识信息
- 中文名称：缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄基-羟基
另见：缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄醇、L-缬氨酰-L-瓜氨酸-对氨基苄醇酰胺 - 英文名称：Val-Cit-PAB-OH（Valine-Citrulline-p-aminobenzyl alcohol）
- 常用别称：VC-PAB-OH、Val-cit-PAB、MC-Val-Cit-PAB 前体、组织蛋白酶B可切连接子中间体、自毁型PAB连接子单元
- CAS号：159857-79-1（常见文献与目录号）；159857-80-4多见于MC-Val-Cit-PAB相关盐型/衍生态
- 分子式：C₁₈H₂₉N₅O₄
- 分子量：约 379.45 Da
- 结构逻辑：N端缬氨酸（Val）→ 瓜氨酸（Cit）二肽酶切单元 → 对氨基苄基（PAB）自毁间隔臂 → 末端苄醇（–CH₂OH）活性羟基
二、性状、溶解性与基础参数
|
项目
|
参数描述
|
|---|---|
|
外观性状
|
白色至黄白色固体粉末，无明确熔点（高温分解）
|
|
纯度
|
科研级常规 ≥95%，高纯级可 ≥98%（HPLC）
|
|
手性
|
L型氨基酸构型为主，需控制消旋
|
|
溶解性
|
易溶于DMSO、DMF、乙腈；甲醇中可溶；水/PBS中溶解度有限（约1 mg/mL级）
|
|
储存条件
|
-20℃、避光、干燥、密封，建议充氮气/氩气
|
|
保质期
|
干燥避光密封状态下常规复测期约12个月（以COA为准）
|
|
运输条件
|
常温或冰袋运输均可，长期保存需低温到货后及时转-20℃
|
|
稳定性注意
|
避免强酸强碱、高温、反复冻融；PAB端伯氨基与苄醇均可能参与副反应
|
三、材料相关内容介绍
1. 分子功能分区
Val-cit-PAB-OH 是ADC（抗体药物偶联物）与酶响应前药研究中常用的可裂解连接子中间体，不是载荷本身，而是“桥梁+开关”：
- Val-Cit 二肽段
组织蛋白酶B底物序列。在血浆中相对稳定，进入细胞溶酶体后被蛋白酶识别并切断Val-Cit酰胺键。 - PAB（对氨基苄基）自毁间隔臂
酶切后暴露PAB氨基甲酸酯/酰胺结构，发生1,6-消除自降解，把载荷以接近原药结构释放出来，减少修饰残留对活性的影响。 - 末端 –OH（苄醇）
可与载荷羧基经酯化/碳酸酯化连接；也可先活化为对硝基苯碳酸酯（PNP）、NHS碳酸酯等，再与小分子药物偶联。
该材料价值在于：血液循环中保持连接稳定，细胞内酶环境触发释放，且释放机制具有条件选择性。
2. 在偶联研究中的典型位置
常见构建链：
抗体/蛋白 – 马来酰亚胺/巯基偶联端 – PEG（可选） – Val-Cit – PAB – 载荷
例：
Fmoc-Val-Cit-PAB-OH → 偶联MMAE → 脱Fmoc → 接MC（马来酰亚胺己酸） → 得到 MC-Val-Cit-PAB-MMAE 药物连接子前体
3. 关键化学敏感点
- 二肽酰胺键：怕长期强酸/强碱水解；
- 瓜氨酸脲基：易吸湿，需干燥；
- PAB芳胺：可进一步碳化/活化；
- 苄醇：可被DCC/HATU/对硝基苯氯甲酸酯活化为碳酸酯；
- 手性中心：偶联试剂与碱浓度不当会引起消旋，建议低温、控pH、用HATU类试剂减少恶唑酮形成。
四、合成方法
路线总览（液相分段偶联法）
步骤1：Cit-PAB-OH 中间体构建
- 起始：L-瓜氨酸（Cit）进行N端保护（Fmoc或Cbz）；
- 与对氨基苄醇（PAB-OH）在DMF/DCM中偶联；
- 缩合剂：HATU / HOBt / DIPEA，或EEDQ（经典文献法）；
- 得到 Fmoc-Cit-PAB-OH 或 Cbz-Cit-PAB-OH。
文献中EEDQ法：
Fmoc-Val/Cit片段 + PAB-OH + EEDQ，室温搅拌过夜，得淡黄色固体，收率可达80%左右
步骤2：Val-Cit二肽延伸
- 脱除Cit N端保护（哌啶/DMF脱Fmoc，或氢解脱Cbz）；
- 与Fmoc-Val-OSu 或 Fmoc-Val-OH/HATU 偶联；
- 得 Fmoc-Val-Cit-PAB-OH。
关键控制：
- 温度 ≤25℃；
- 碱当量不宜过大；
- 使用手性HPLC或Marfey法监控消旋率。
步骤3：全局脱保护（得到Val-Cit-PAB-OH）
- 若N端为Fmoc：20%哌啶/DMF处理，去Fmoc；
- 若侧链/端基有Cbz：Pd/C + H₂轻氢解；
- 得到无N保护目标产物 Val-Cit-PAB-OH（游离胺端 + 苄醇端）。
步骤4：端基活化与载荷连接（延伸应用）
- 苄醇 → 对硝基苯碳酸酯（PAB-PNP）：用p-硝基苯氯甲酸酯；
- 与MMAE/MMAF/DOX等含胺或含醇载荷构建氨基甲酸酯/酯键；
- 或N端自由胺接MC-NHS，得到马来酰亚胺功能化药物连接子。
合成工艺要点
|
风险点
|
控制策略
|
|---|---|
|
二肽消旋
|
低温、弱碱、HATU/HOBt、短时反应
|
|
副反应（自偶联）
|
严格计量、低浓度、分步滴加
|
|
游离PAB残留
|
反相HPLC制备、萃取洗涤
|
|
手性纯度下降
|
手性柱监测，必要时手性制备
|
|
吸湿降解
|
反应体系控水，成品干燥器保存
|
五、表征方法
1. 液相色谱（HPLC / RP-HPLC）
- 目的：纯度、有关物质、游离PAB、缺失肽杂质；
- 条件：C18反相，乙腈/水+0.1% TFA或甲酸；
- 标准：科研级单峰主峰，纯度≥95%；高纯级≥98%。
2. 质谱（MS / LC-MS）
- 确认分子离子峰：[M+H]⁺ 理论约 380.2；
- 监测中间体：Fmoc-Val-Cit-PAB-OH 约 m/z 602.6 ；
- 用于判断活化产物、偶联产物分子量。
3. 核磁共振（¹H-NMR / ¹³C-NMR）
- 确认：Val异丙基双甲基、Cit侧链脲基、芳环AA’BB’、苄醇CH₂OH；
- 积分比判断PEG（若有）、保护基残留、端基完整度。
4. 手性与光学表征
- 比旋度测定；
- 手性HPLC确认L/L构型未消旋；
- 对关键批次做对映体杂质限度控制。
5. 其他辅助
- FTIR：酰胺I/II带、脲基、羟基；
- UV：芳环吸收约246 nm附近；
- 水分/残留溶剂：Karl Fischer、GC；
- 元素分析（可选）。
六、瑞禧生物供应与衍生产品
供应商：西安瑞禧生物
瑞禧生物可提供 Val-Cit-PAB-OH 及VC类连接子全系定制，覆盖“中间体—活化酯—药物连接子—ADC构建”环节。
1. 基础连接子中间体
- Val-Cit-PAB-OH（无保护，自由胺+N端）
- Fmoc-Val-Cit-PAB-OH（N端保护，便于分段合成）
- Cbz-Val-Cit-PAB-OH
- Val-Ala-PAB-OH（同源酶切序列替代）
2. 端基活化与功能化衍生物
- Val-Cit-PAB-PNP（对硝基苯碳酸酯活化）
- MC-Val-Cit-PAB-OH / MC-Val-Cit-PAB-PNP（马来酰亚胺偶联端）
- Mal-PEG2-Val-Cit-PAB-PNP（含PEG柔性臂与巯基偶联端）
- DBCO-Val-Cit-PAB-OH（无铜点击化学端）
- Azide-PEG4-Val-Cit-PAB-OH（叠氮点击端）
3. 载荷连接子成品（科研定制）
- Val-Cit-PAB-MMAE
- MC-Val-Cit-PAB-MMAE
- Val-Cit-PAB-MMAF
- Azide-PEG4-VC-PAB-Doxorubicin（酶切前药）
- Cy5-VC-PAB探针、荧光标记释放模型
4. 定制服务能力
- 规格：10 mg / 50 mg / 100 mg / 500 mg / 克级；
- 纯度：95% / 98% / 手性单一构型；
- 交付：固体粉末、DMSO母液、避光瓶；
- 质控：HPLC、MS、NMR、手性分析、COA报告；
- 延伸：ADC偶联、DAR调控、体外酶切释放曲线测试。
七、使用建议
- 取用前回温至室温再开盖，防止冷凝水吸湿；
- 初始溶解优先用无水DMSO配母液，分装冻存，避免反复冻融；
- 与载荷偶联时，苄醇建议先活化为碳酸酯/PNP，再与胺类载荷反应；
- 酶切验证可用组织蛋白酶B缓冲体系，HPLC/MS跟踪Val-Cit断裂与PAB自降解；
- 若用于蛋白偶联，优先走MC/马来酰亚胺-巯基路线，减少N端随机酰化。
八、温馨提示
本品为科研级有机中间体，仅供科研实验使用，不能用于人体实验、临床诊断、治疗及食用用途。涉及细胞或动物研究时，需遵守所在机构生物安全与伦理管理规范。
九、小结
Val-cit-PAB-OH 通过“Val-Cit酶切序列 + PAB自毁间隔 + 苄醇偶联端”实现条件触发释放逻辑，是ADC与前药化学中结构定义清晰、模块可拓展的连接子平台。其合成核心在于分段偶联、手性保持与端基可控活化；表征需以HPLC纯度、LC-MS分子量、NMR结构确认和手性分析为基准。
西安瑞禧生物可提供从 Val-Cit-PAB-OH 基础粉体到MC/DBCO/Azide/PEG化衍生物、再到载荷偶联成品的连续定制服务，适配抗体偶联、靶向前药、酶响应释放与荧光追踪等多类科研场景。